cDNA鏈合成試劑盒的品牌是百奧萊博，是優質的基因結構和功能產品，本制品用于科學研究，我公司的cDNA鏈合成試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括cDNA鏈合成試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：cDNA鏈合成試劑盒
英文名稱：Reverse Transcriptase Kit
產品貨號：WH0097
產品規格：25次|100次

本試劑盒是是專為兩步法RT-PCR步實驗配制的，具有高靈敏度的RT-PCR反應系統，可以從低量的總RNA或poly（A)+ RNA合成鏈cDNA。該試劑盒中使用的逆轉錄酶Quant Reverse Transcriptase與通常使用的Moloney鼠白血病病毒來源的MMLV和鳥成髓細胞病毒來源的AMV不同，是一種使用大腸桿菌工程菌進行重組表達的全新逆轉錄酶。該酶能夠轉錄多種RNA模板，zuì大限度將RNA轉錄成cDNA鏈。

產品特點：
·反轉錄效率可達90%。
· 37℃一步完成整個實驗。
·可通讀GC含量高、二級結構復雜RNA模板。
·對后繼的PCR或定量PCR實驗兼容性好，適合各種PCR耐熱聚合酶。

產品應用：
·適合于反轉錄模板量為50ng-2μg的總RNA。
·實時熒光定量RT-PCR。
·半定量PCR反應。
· 3"-，5"- RACE等。

組分	25次	100次
Quant Reverse Transcriptase	25μl	2×50μl
Oligo（dT)15（10μM)	60μl	240μl
Random（10μM)	60μl	240μl
10×RT Mix	50μl	200μl
RNase-Free ddH2O	1ml	2×1ml
Super Pure dNTPs（2.5mM each)	60μl	240μl

儲存條件：20℃保存。

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．用于cDNA合成反應的溶液試劑盡可能用DEPC進行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時，先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行過濾除菌處理。
2．RNA樣品要避免基因組DNA污染。
3．避免多次反復凍融RNA。
4．試劑盒的各組成成分應在-20℃保存。
5．cDNA產物應置于-20℃保存。

操作步驟：
下列操作步驟適用于模板量為50ng-2μg的總RNA，如果總RNA量大于2μg，請按比例擴大反應體系。

1．將模板RNA在冰上解凍；引物、10×RT mix（其中包含RNasin和DTT）、Super pure dNTP混合液、RNase-Free ddH2O在室溫（15-25℃）解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。
2．按照表1的逆轉錄體系配制混合液，徹底混勻，渦旋振蕩時間不超過5min。簡短離心，并置于冰上，RNA模板請于第4步加入。
  注意：如果下游進行熒光定量PCR實驗，建議使用10μl逆轉錄反應體系，各反應組分相應減半。從而可以與SuperReal PreMix Plus（WH0103&WH0104）以及QuickFire qPCR PreMix（WH0105&WH0106）的反應次數匹配。
3．如果要做多個逆轉錄反應，可以將配制好的混合液后分裝在單個反應管中，置于冰上。
4．將模板RNA（50ng-2μg）加入到混合液中，徹底混勻，渦旋振蕩時間不超過5 sec，簡短離心以收集管壁殘留的液體。
5．37℃孵育60 min。
6．將逆轉錄的產物進行后續PCR反應和熒光定量PCR反應。

表1：逆轉錄反應體系：

加入物	加入量	終濃度
10×RT Mix	2 μl	1×
Super pure dNTPs（2.5mM each）	2 μl	0.25mM each dNTP
Oligo-（dT)15或Random（10μM)*	2 μl	1 μM
Quant Reverse Transcriptase	1 μl	（20 μl反應體系)
RNase-Free水	X μl
模板RNA，在第4步加入	X μl
總體積	20 μl

*也可根據實驗具體需要，加入基因特異性引物

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