北京百奧萊博供應的常態(tài)大腸桿菌細胞轉(zhuǎn)化液(免感受態(tài)細胞制備)用于科研目的，我公司的常態(tài)大腸桿菌細胞轉(zhuǎn)化液(免感受態(tài)細胞制備)品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括常態(tài)大腸桿菌細胞轉(zhuǎn)化液(免感受態(tài)細胞制備)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：常態(tài)大腸桿菌細胞轉(zhuǎn)化液(免感受態(tài)細胞制備)
英文名稱：Tranzol
產(chǎn)品貨號：BTN51101
產(chǎn)品規(guī)格：20次

本品能使各種常態(tài)的E.coli細胞直接用于快速轉(zhuǎn)化實驗，使廣大用戶不再因為簡單的轉(zhuǎn)化實驗而再為感受態(tài)細胞的制備，保存和運輸?shù)确爆嵉氖虑槎傩模蟠蟮乜s短了基因克隆實驗的時間，提高使用者的工作效率。

產(chǎn)品特點：
1. 不需專門制備感受態(tài)細胞,直接使用常態(tài)的細胞進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)化,隨用隨配,十分方便。
2. 常態(tài)細胞包括新鮮培養(yǎng)的菌液,新鮮的或4℃放置數(shù)月的培養(yǎng)基菌落,甘油菌種保存液等。
3.適用菌種和質(zhì)粒廣泛,用過的E.coli菌種包括K12 系的DH5a和Tg1，B 系的BL21(DE3)。用過的質(zhì)粒有pGEM，pET和Clion系列等。
4.轉(zhuǎn)化效率適中，使用10ng質(zhì)粒轉(zhuǎn)化一般能得到上萬個轉(zhuǎn)化子)效率在10E5 到10E6 CFU/ug質(zhì)粒之間),使用3-5μL連接液轉(zhuǎn)化一般能得幾千個轉(zhuǎn)化子,足夠篩選重組子使用(但不適合構建文庫)。
5. 單管快速操作，整個操作可以在一個1.5mL塑料離心管中進行，zuì短可以在三十分鐘內(nèi)完成，不需要過夜細菌培養(yǎng),熱休克處理甚至恒溫搖床,其適用于自動化的大規(guī)模克隆篩選工作。
6. 穩(wěn)定性好，本可以在-20℃條件下長期保存而不用擔心轉(zhuǎn)化效率的降低,而感受態(tài)細胞在同樣條件下會迅速失去活性。

成分	規(guī)格
常態(tài)轉(zhuǎn)化液	1ml
陽性對照(pGEM3或pUC19)10μL,1ng/μL	5T
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 標記無菌的1.5mL塑料離心管并加入1mL液體培養(yǎng)基(如SOC或LB)，每次轉(zhuǎn)化試驗zuì好加上陽性對照(用提供的pGEM3或其他質(zhì)粒)和陰性對照(不加DNA)各一個。
2. 如果使用E.coli菌落,則直接用接種環(huán),無菌牙簽或無菌吸頭從培養(yǎng)皿上挑取1-5個菌落(直徑在3-5 mm之間)到每個離心管中，用移液槍輕柔吹打散開。如果使用甘油菌種保存液,則直接取50-100μl菌種液到1mL培養(yǎng)液中。如果使用單個菌落培養(yǎng)得到的新鮮培養(yǎng)液，則取1mL培養(yǎng)了3-4小時的菌液直接從第4步開始。
3. 37℃保溫1小時(如果保溫時間延長到3-4小時，可以提高轉(zhuǎn)化效率一倍，但過長則轉(zhuǎn)化效率又開始降低)。
4.室溫10000rpm離心1分鐘后小心移棄上清(液體培養(yǎng)基)，離心速度低于10000rpm則細菌沉淀易丟失。沉淀的細菌約芝麻或麥片大小為宜。細胞過多或過少都不好。
5. 短暫離心，用移液槍小心將殘留的培養(yǎng)液(約50μl)吸出，否則殘留培養(yǎng)基將會嚴重影響轉(zhuǎn)化效率，故此步不能省略。
6. 加入50μl 冰浴的Clion轉(zhuǎn)化液并小心將細胞吹打均勻。
7. 加DNA樣品。在樣品管中加入1-5μl連接反應液并輕柔吹打均勻；在陽性對照管中加入5 ng陽性質(zhì)粒(沒被酶切的載體，也可以使用常用的pGEM，pUC，pBR322等質(zhì)粒)；在陰性對照管中加入連接反應的陰性對照，如果沒有則不加入任何溶液或加入1-5μl無菌水。
8. 將上述離心管置于-20℃直到液體凝固為止(一般需要20分鐘到1小時)，然后冰浴放置5-10分鐘。
9.在每個離心管中加入1mL無抗菌素的SOC或LB培養(yǎng)液，混勻后置37℃水浴保溫1小時以便讓抗性基因表達,否則將沒有轉(zhuǎn)化子生長。
10. 將溶液充分吹打混勻后分別取30-200μl分別涂于含相關的抗菌素的培養(yǎng)盤上，剩余溶液zuì好留4℃待用。
11. 37℃ 16-24小時培養(yǎng)，陰性對照盤上不應有任何落菌，否則可以判斷操作中有污染或培養(yǎng)基中抗菌素濃度不夠。使用質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的陽性對照100μl涂盤一般能有上千個菌落。連接樣品轉(zhuǎn)化所得菌落數(shù)將取決于連接反應效率等多種因素，100μl的涂盤一般有幾十到幾百個轉(zhuǎn)化子。

使用效果：

左圖是用10 ngClionG載體轉(zhuǎn)化10個E.coli Tg1菌落后得到的轉(zhuǎn)化子。右圖是用3μL連接液(ClionB載體+1 Kb DNA片段,10μL反應體系)轉(zhuǎn)化10個E.coli DE3菌落后37℃過夜保溫得到的轉(zhuǎn)化子。涂盤量均為200μL。

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貨號	名稱	規(guī)格
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