Ad-GFP-LC3B由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，我公司專注于細(xì)胞凋亡與增殖產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的Ad-GFP-LC3B質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括Ad-GFP-LC3B在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Ad-GFP-LC3B
英文名稱：Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein
產(chǎn)品貨號：YT159
產(chǎn)品規(guī)格：1ml|10×1ml

本品是一種可以表達(dá)GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染細(xì)胞或組織后進(jìn)行細(xì)胞自噬(autophagy)的檢測。

LC3是酵母自噬關(guān)鍵蛋白ATG8在哺乳動物中的同源蛋白。LC3zuì初被分析鑒定為microtubule-associated protein 1 light chain 3 。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亞家族，其中對于LC3B的研究zuì為廣泛。到目前為止，LC3B被認(rèn)為是細(xì)胞自噬信號通路zuì為關(guān)鍵的標(biāo)志性蛋白。LC3B是一個具有125個氨基酸殘基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22個氨基酸蛋白，從而暴露出C端的甘氨酸，人們把它命名為胞質(zhì)形式的LC3B I。在細(xì)胞自噬的過程中，其C端暴露的甘氨酸經(jīng)過一個類似泛素化的過程，以ATG7為E1樣激活酶， 以ATG3為E2樣連接酶，以Atg12-Atg5-Atg16復(fù)合物為E3樣連接酶，在C端甘氨酸上共價連接上磷脂酰乙醇胺而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質(zhì)定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬體的內(nèi)膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后，自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬體內(nèi)膜上的LC3B II則被溶酶體內(nèi)的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其強(qiáng)的疏水性，在SDS-PAGE電泳時，LC3B II比LC3B I遷移得更快，其表觀分子量分別為14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染細(xì)胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點(diǎn)的形式表現(xiàn)出來。

自噬是一種在進(jìn)化上高度保守的通過溶酶體吞噬并降解部分自身組分的細(xì)胞內(nèi)分解代謝途徑。自噬與多種生理功能有關(guān)，在饑餓等不利的環(huán)境條件下， 細(xì)胞通過自噬降解多余或異常的細(xì)胞內(nèi)組分，為細(xì)胞的生存提供能量及原材料，促進(jìn)生物體的生長發(fā)育、細(xì)胞分化及對環(huán)境變化產(chǎn)生應(yīng)答。自噬異常與多種病理過程如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝疾病、病原體感染等都有密切關(guān)系。由于細(xì)胞自噬在生理和病理過程中都有重要作用，自噬已經(jīng)成為細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的一個新的研究熱點(diǎn)。

Ad-GFP-LC3B是百奧萊博的重組腺病毒，感染后能夠在靶細(xì)胞中有效表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈現(xiàn)明亮的綠色熒光，可以用于細(xì)胞自噬的檢測。

腺病毒感染細(xì)胞后為瞬時表達(dá)，通常不會與基因組DNA重組，不能用于篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。本產(chǎn)品感染體內(nèi)外細(xì)胞后，有效表達(dá)時間通常不少于7天，不同細(xì)胞和組織的有效表達(dá)時間有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表達(dá)很可能會大大減弱。

百奧萊博的Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重組腺病毒載體系統(tǒng)，感染普通的細(xì)胞后不能進(jìn)行擴(kuò)增和重組，從而可以有效降低本產(chǎn)品在活體生物中的風(fēng)險。

本產(chǎn)品可以在表達(dá)E1的HEK293A、HEK293等適當(dāng)細(xì)胞中擴(kuò)增。

本產(chǎn)品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用時可以按照108pfu/ml進(jìn)行計算。如果按照20 MOI感染6孔板的細(xì)胞，每孔50萬細(xì)胞計算，共可以感染10個孔；如果按照20 MOI感染24孔板的細(xì)胞，每孔10萬細(xì)胞計算，共可以感染50個孔。如果MOI值提高，則相應(yīng)可以感染的孔數(shù)會減少；如果MOI值降低，則相應(yīng)可以感染的孔數(shù)會增加。

注意事項：
1. 反復(fù)凍融會降低病毒滴度，如有必要請在收到本產(chǎn)品后分裝保存。病毒融解后，如果在一周內(nèi)使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存時間超過一年，可能會導(dǎo)致滴度下降，此時建議重新測定病毒滴度。
2. 腺病毒感染需要細(xì)胞表面的CAR受體，請確認(rèn)擬使用的細(xì)胞或組織可以被腺病毒感染。
3. 本產(chǎn)品使用前請仔細(xì)閱讀附錄1《腺病毒使用安全規(guī)范》。本產(chǎn)品生物安全等級為Biosafety Level 1 (BSL-1)，沒有確鑿證據(jù)顯示會導(dǎo)致健康成人產(chǎn)生疾病，可以按照常規(guī)的微生物實(shí)驗(yàn)操作要求進(jìn)行操作。

儲存條件：-20℃，有效期1～2個月。

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名稱：細(xì)胞凋亡DNA斷裂片段提取試劑盒
貨號：YT120
規(guī)格：50次
本試劑盒是針對細(xì)胞凋亡過程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設(shè)計的。可以非常有效地抽提zuì小片段為180-200bp的DNA ladder，同時又可以抽提到50kb以上的基因組DNA。DNA ladder也稱DNA fragmentation，是細(xì)胞凋亡的一個重要指標(biāo)。通常觀察到DNA ladder，就可以判定細(xì)胞發(fā)生了凋亡。本試劑盒足夠抽提50個細(xì)胞或組織樣品。

試劑盒組份：
樣品裂解液———30ml
蛋白酶K————130μl
10M 醋酸銨——6ml
TE——————6ml

注意事項：需自備Tris平衡苯酚、lǜ仿和無水乙醇。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

名稱：細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒
貨號：YT130
規(guī)格：100次
本試劑盒提供了一種經(jīng)典而又快速簡便的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死檢測方法。染色快速方便，兩種染料的染色僅需20-30分鐘，一步染色即可完成。使用方便，使用流式細(xì)胞儀檢測時，無需稀釋等配制過程，也無需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測100個樣品，每個樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬。

試劑盒組份：
細(xì)胞染色緩沖液———100ml
Hoechst染色液———0.5ml
PI染色液——————0.5ml

本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)雙染的方法。細(xì)胞發(fā)生凋亡時，染色質(zhì)會固縮。
Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜，染色后凋亡細(xì)胞熒光會比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。碘化丙啶(PI)不能穿透細(xì)胞膜，對于具有完整細(xì)胞膜的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞不能染色。而對于壞死細(xì)胞，其細(xì)胞膜的完整性喪失，碘化丙啶(PI)可以染色壞死細(xì)胞。上述兩種染料雙染后，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測時，正常細(xì)胞為弱紅色熒光＋弱藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光＋強(qiáng)藍(lán)色熒光，壞死細(xì)胞為強(qiáng)紅色熒光＋強(qiáng)藍(lán)色熒光。參考下圖，左圖為誘導(dǎo)凋亡前的正常細(xì)胞，右圖為誘導(dǎo)凋亡后的細(xì)胞。



注意事項：
1. 需使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行紅色和藍(lán)色雙熒光檢測。也可使用熒光顯微鏡檢測。
2. 染色后宜盡快檢測。
3. Hoechst 33342對人體有害，碘化丙啶(PI)對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。

儲存條件：-20℃避光，有效期一年。

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