北京百奧萊博供應的DNA分選純化磁珠用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多DNA分選純化磁珠等DNA提取純化產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括DNA分選純化磁珠在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：DNA分選純化磁珠
英文名稱：DNA Size Selection Beads
產品貨號：WH0199
產品規格：15ml|60ml|300ml

本制品是一款可以用于DNA片段分選和DNA產物純化的核酸純化產品。采用高性能磁珠和獨特緩沖液體系，通過調整磁珠與樣本的比例，無需割膠即可實現100 bp～1000 bp的雙鏈及單鏈DNA片段的分選及純化。使用本試劑盒可有效去除反應體系中的dNTP、鹽離子及有機雜質等，所得DNA片段純度高，回收效率可達90%以上。可廣泛應用于NGS文庫構建中特定長度DNA片段的分選與純化。

產品特點：
·：DNA片段純化得率高，效率可達90%。
·簡便：無需割膠，自由選擇所分選DNA片段的長度。
·兼容：兼容手工操作或自動化工作站的高通量操作。

適用范圍：
高通量測序文庫構建中DNA片段的分選及純化，PCR反應體系、酶切及連接反應體系中DNA的純化，游離核酸篩選，核酸提取過程中小片段DNA的去除等。

產品組成：

組分	WH0199-1	WH0199-2
磁珠結合液DM	15ml	4×15ml
洗脫緩沖液TB	15ml	2×15ml

儲存條件：2-8℃保存一年。

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．磁珠結合液DM于4℃儲存，避免凍存，實驗前將磁珠結合液DM從4℃取出，室溫放置20分鐘使磁珠平衡至室溫。
2．由于部分反應體系中的成分可能會對分選片段的長度產生影響，因此需要根據具體情況調整所加入磁珠的體積。
3．純化小的DNA片段（≤200bp），可加入1.4倍或1.8倍的磁珠結合液DM進行純化回收，提高回收效率。
4．所使用的80%乙醇需自行準備，建議現用現配，且在使用80%乙醇進行洗滌的過程中，不要將試管從磁力架上轉移。

DNA濃度及純度檢測：
純化回收的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和DNA Chips檢測濃度與片段大小。

操作步驟：

一、DNA片段分選步驟
本操作步驟適合酶切處理或超聲打斷基因組文庫構建過程中片段的分選和純化。

1．將平衡至室溫的磁珠結合液DM振蕩混勻，取適當體積的磁珠結合液DM加入待分選的DNA片段中充分混勻（加入磁珠結合液DM的體積可參照表1），室溫靜置5min （期間混勻一次)。
  表1：DNA片段分選推薦磁珠結合液DM用量

打斷片段平均長度（bp)		~100	~200	~300	~480	~780
文庫片段平均長度（bp) （打斷片段+接頭)		~220	~320	~420	~600	~900
磁珠用量	次篩選	0.7倍	0.6倍	0.5倍	0.4倍	0.3倍
	第二次篩選	0.1倍	0.1倍	0.1倍	0.1倍	0.1倍

2．瞬時離心將溶液離心至管底，將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，待磁珠完全吸附后轉移上清至新的離心管中（切勿吸到磁珠，建議留存2～3μl上清），棄磁珠。
3．加入轉移上清體積0.1倍的磁珠結合液DM，充分混勻后室溫靜置5min（期間混勻一次）。
4．將離心管放置于磁力架上吸附2～5min，待磁珠完全貼壁后，用移液器小心去除上清。
  注意：步驟4、5和6均需在磁力架上操作，切勿將離心管從磁力架上移開。
5．向步驟4的離心管中加入200 μl 80%乙醇溶液（現用現配），輕輕吹打3～5次（不要吹打磁珠），磁力架上靜置2 min，用移液器小心去除上清。
6．重復步驟5一次。
7．用移液器盡量去除液體，室溫晾干2～5min，將離心管從磁力架上取下，加入25 μl洗脫緩沖液TB，用槍吹打3～5次充分混勻，室溫靜置3～5min。
  注意：磁珠在室溫晾干切勿超過5min，過度干燥嚴重影響洗脫效率，45℃加熱洗脫可以提高洗脫效率。
8．將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，待磁珠完全吸附后，將上清轉移至一個新離心管中，并于適當條件保存，或直接用于NGS文庫構建的PCR富集反應。

二、PCR富集后文庫的純化步驟
1．向PCR反應產物中加入1倍體積的磁珠結合液DM充分混勻，室溫靜置5min （期間混勻一次)。
2．將離心管放置于磁力架上吸附2～5min，待磁珠完全吸附后，棄上清。
  注意：步驟2、3和4均需在磁力架上操作，切勿將離心管從磁力架上移開，切勿吹散磁珠。
3．離心管放置于磁力架上，加入200 μl 80%乙醇溶液（現用現配），輕輕吹打3～5次（不要吹打磁珠），磁力架上靜置2～5min，小心吸棄上清。
4．重復步驟3一次。
5．用移液器盡量去除液體，室溫晾干2～5min，將離心管從磁力架上取下，加入適當體積的洗脫緩沖液TB，用槍吹打3～5次，室溫靜置3～5min。
  注意：磁珠在室溫晾干切勿超過5min，過度干燥嚴重影響洗脫效率，45℃加熱洗脫可以提高洗脫效率。
6．將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，磁珠完全吸附后，將上清轉移至一個新離心管中，并于-20℃保存。

三、無需分選的DNA純化步驟
本操作步驟適合于無需片段分選的文庫構建過程中DNA的純化（如游離核酸測序文庫等)。

1．將DNA溶液轉移到1.5ml離心管中，將磁珠振蕩混勻，加入1倍體積的磁珠結合液DM充分混勻，室溫靜置5min（期間混勻一次）。
2．將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，待磁珠完全吸附后棄上清。
  注意：步驟2、3和4中切勿將離心管從磁力架上移開，切勿吹散磁珠。
3．將離心管放置于磁力架上，加入200 μl 80%乙醇（現用現配），輕輕吹打3～5次（不要吹打磁珠），磁力架上靜置2～5min，小心去除液體。
4．重復步驟3一次。
5．用移液器盡量去除液體，室溫晾干2～5min，將離心管從磁力架上取下，加入25 μl洗脫緩沖液TB，用槍吹打3～5次，室溫洗脫3～5min，轉移上清至新的離心管中，于適當條件保存，或直接用于NGS文庫構建的PCR富集反應。
  注意：磁珠在室溫晾干切勿超過5min，過度干燥嚴重影響洗脫效率，45℃加熱洗脫可以提高洗脫效率。
6．PCR富集后文庫的純化參照步驟二。

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  本試劑盒在普通堿裂解法的基礎上進行了改進，全新的Lyticase可以有效的破除酵母細胞壁，硅基質膜和緩沖液系統能專一的結合質粒DNA，同時可以zuì大限度的去除蛋白及其他雜質，整個過程方便快捷，不需使用有毒有害試劑，可以同時處理多個樣品。除適用于酵母細胞外，也可用于大腸桿菌。使用本試劑盒提取的質粒DNA可用于各種分子生物學實驗，如連接、轉化、測序和文庫篩選等。

試劑盒組成：

組份	50次
Buffer P1	15ml
Buffer P2	15ml
Buffer N3	20ml
Buffer PS	15ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(濃縮液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	150μl
玻璃珠	2g
吸附柱DM及收集管	50套

自備試劑：無水乙醇，異丙醇。

實驗前準備及重要注意事項：
1、所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環境穩定保存1年，將吸附柱置于2～8℃可保存更長時間，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可穩定保存6個月。
2、次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存。
3、次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在Buffer PW中加入無水乙醇。
4、使用前請檢查Buffer P2、Buffer N3是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。
5、注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer N3，使用后應立即蓋緊蓋子。
6、提取的質粒量與酵母菌株、質粒拷貝數、培養條件等因素有關，通常酵母質粒拷貝數都很低，通過電泳或分光光度計法都很難檢測到。

操作步驟：
1、取1-5ml酵母培養物(zuì多不超過5×107個酵母細胞，一般對于釀酒酵母OD600=1.0時，相當于1-2×107細胞/ml)加入離心管(自備)中，12000rpm(~～13400×g)離心30秒，收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。
2、向菌體中加入250μl Buffer P1(請先檢查是否已加入RNase A)，重懸沉淀。
3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads)，渦旋震蕩10分鐘。
4、向離心管中加入250μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻6-8次，室溫放置5-10分鐘，此時菌液應變得清亮粘稠。
注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質粒中混有基因組DNA片段。如果溶液未變得清亮，提示可能菌量過大，裂解不徹底，應減少菌體量。
5、向離心管中加入350μl Buffer N3，立即溫和地上下顛倒混勻6-8次，此時出現白色絮狀沉淀，12000rpm離心20分鐘。
注意：Buffer N3加入后應立即混勻，避免產生局部沉淀。
6、柱平衡: 向已裝入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7、將步驟5所得上清加入到已裝入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
注意：吸附柱的zuì大容積為750μl，溶液分2次過柱。
8、12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
9、向吸附柱加入150μl Buffer PB，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。
11、將吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm離心2分鐘，倒掉廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。
12、將吸附柱置于一個新的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100μl Buffer EB，室溫放置數分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質粒。
注意：
1)為了增加質粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置數分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質粒溶液收集到離心管中。
2)質粒拷貝數較低或>10 kb時，Buffer EB在65-70℃水浴預熱，可以增加提取效率。
3)通常酵母質粒拷貝數很低，通過電泳或者分光光度計法都很難檢測到。提取的質粒如果用于下一步實驗，通常建議使用量為：用作PCR模板可使用1–5μl質粒，用于轉化大腸桿菌可使用5–10μl質粒。
4)轉化大腸桿菌時應使用商業化高轉化效率的感受態細胞。

儲存條件：室溫(15～30℃)

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