即用型藍白T載體A型由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，僅用于生物化學研究方面，我公司的即用型藍白T載體A型品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括即用型藍白T載體A型(T7-SP6，有MCS)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：即用型藍白T載體A型(T7-SP6，有MCS)
英文名稱：Instant Blue-White Vector T，Type A
產品貨號：BTN60603
產品規格：20次

本產品是用Xcm I酶切環狀的可保種型藍白T載體(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的線性DNA片段(載體部分)，其兩個末端的5′都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶(如Taq DNA聚合酶)擴增得到的PCR片段。

產品特點：
1. 由于是通過Xcm I酶切制備，所以載體兩端的帶T率為，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉移酶在平末端載體加尾得到的T載體。
2. 克隆的陽性率一般在90%以上，縮短了篩選過程。
3. 插入位點兩側有對稱的常見酶切位點(如EcoR I)，便于對克隆的PCR片段進行近一步的分析。
4. 克隆位點兩側分別有T7和T3 RNA聚合酶啟動子，便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。
6. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區內，可以進行藍白斑篩選。
7.含有絲狀噬菌體f1 復制起始子，可以制備單鏈DNA。

產品組成：

成分	規格
即用型藍白T載體(40ng/uL)	20μl
陽性對照(40ng/uL)	5μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

使用方法：

一. PCR產物的純化和定量
1. 將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳分離。zuì好不要使用TBE緩沖液，因為它會影響DNA的膠回收效率。
2.在長波(360nm)紫外燈下快速切膠，盡可能切掉多余的凝膠。為避免嘧啶二聚體的形成，可以使用百奧萊博的DNA防護劑UV Scavenger(BTN60601)。
3. 用百奧萊博的柱式DNArc(BTN60202)純化回收PCR片段。溶解PCR片段的超純水體積越小越便于后續操作。
4. 將回收的片段與濃度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或綠如藍染料(BTN70303)的瓊脂糖凝膠中電泳，通過比較DNA條帶的熒光強度而估測PCR純化產物的濃度。注意：一般不推薦使用測OD260的方法，因為回收的DNA很珍貴，該方法需要比較多的DNA。
5. 如果所得的DNA片段濃度較低，可以使用本公司核酸濃縮劑(BTN110801)將其濃縮到需要的濃度。
6. 如果PCR片段為平末端，則需要用加A試劑盒處理，否則不能用于與T載體的連接反應。

二. 連接反應
1. 短暫離心裝有T載體的離心管。
2.在兩個離心管中加入下列成分：

成分	樣品管	負對照	正對照
自備T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl	1μl
藍白T載體(40 ng/uL)	1μl	1μl	1μl
自備PCR純化產物	見下注	不加	不加
陽性對照(40ng/uL)	不加	不加	1μl
自備T4 Ligase(5-10U/μL)	1μl	1μl	1μl
補超純水到	10μl	10μl	10μl

注：PCR純化產物與藍白T載體的摩爾比zuì好為3-10，可以按下面的公式計算出連接反應中需要的PCR純化產物的ng數:

假如插入片段和載體的連接比例設定為3，連接反應中加入藍白T載體(長度為3Kb)的量為40ng，則需要長度為0.5Kb的PCR純化產物的量是:

3. 用移液器吹打連接反應使之混勻后，16℃孵育12小時(或按T4 Ligase供貨商提供的說明書進行連接)。

三. 細菌轉化
1. 將100μL感受態細胞于冰上解凍。注意：zuì好使用轉化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受態細胞進行轉化，因為采用單堿基突出端進行連接不是很有效。
2. 取5μL連接產物加入到感受態細胞中，輕輕旋轉幾次以混勻內容物。在冰上放置30分鐘。
3. 將管放入預加溫到42℃的水浴中，熱休克90秒。快速將管轉移到冰浴中。

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名稱：即用型藍白T載體C型(T7-T3，無MCS)
貨號：BTN120513
規格：20次
本產品是用Xcm I酶切線性化的DNA片段，其兩個末端的5′都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶(如Taq DNA聚合酶)擴增得到的PCR片段。

產品特點：
1. 由于是通過酶切制備，所以載體兩端的帶T率為，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉移酶在平末端載體加尾得到的T載體。
2. 克隆的陽性率一般在90%以上，縮短了篩選過程。
3. 無Nde I和Nco I等多克隆位點，便于重組基因的克隆
4. 來源于pBlueSoript Ⅱsk(+)，故克隆位點兩側分別有T7和T3 RNA聚合酶啟動子，便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。
6. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α肽編碼區內，可以進行藍白斑篩選。
7.含有絲狀噬菌體f1復制起始子，可以制備單鏈DNA。

產品組成：

組分	規格
即用型藍白T載體C型(10ng/μL)	60μl
陽性對照(35ng/μl)	30μl

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

質粒圖譜


名稱：裂殖酵母化學感受態細胞制備試劑盒
貨號：BTN100103A
規格：20次
本裂殖酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理，快速制備裂殖酵母化學感受態細胞，用于長期凍存以備后續轉化的產品。

產品特點：
1.一次制備，-80℃保存，多次使用，免去每次轉化都要制備裂殖酵母感受態細胞。
2. 操作簡單，單溶液制備，除酵母培養的時間外，整個操作只需要30分鐘。
3. 主要用于裂殖酵母S. pombe ，其他多種實驗用酵母菌株zuì好選用酵母化學感受態細胞制備試劑(BTN81109)。
4. 受體酵母可以不含質粒，也可用于攜帶有選擇性質粒的酵母(如雙雜交體系中的酵母)。
5. zuì高轉化效率可達到0.2-1×105個轉化子/μg質粒DNA。
6. 得到的感受態細胞可以用各種線性或環狀酵母穿梭質粒DNA進行轉化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
7.可以用于酵母雙雜交、定點突變、基因破壞、等位突變基因修復等實驗。
8. 本產品可以制備20只裂殖酵母感受態細胞(需要100mL裂殖酵母培養液)，其中A型只用于制備感受態細胞，B型還帶轉化液。

試劑盒組成：

組分	BTN100103A	BTN100103B
溶液A	1ml	1ml
裂殖酵母轉化液	-	一套(20次)
使用說明書	1份	1份

儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

使用效果：
將一個酵母菌落接種到SLD培養基中，30℃搖晃培養直到OD600達到0.6-1.0，冰浴15分鐘后離心棄上清，用自備無菌水洗滌三次，然后用相當于菌液zuì初體積百分之一的溶液A重懸，按每管50μl分裝，放-80℃保存。

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