通用型T載體克隆菌落PCR檢測試由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研試驗，本品質量穩定，價位合理，需要通用型T載體克隆菌落PCR檢測試等克隆與表達產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括通用型T載體克隆菌落PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：通用型T載體克隆菌落PCR檢測試劑盒
英文名稱：Universal T vector colony PCR identification Kit
產品貨號：ALH351
產品規格：80次|400次

本試劑盒采用通用T載體引物研制的通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒，只需購買一種試劑盒，便可用于市面上所有常見的T載體(包括pGEM，pUC，pBluescript系列) 連接陽性克隆的鑒定。此外，采用T3,T7或者SP6做引物的菌落PCR鑒定試劑盒引物距離插入位點的距離非常短，因此在鑒定100bp左右或者更小片段的插入時，陰性克隆的引物二聚體條帶和陽性克隆擴增條帶大小接近，無法區分。往往把引物二聚體的條帶看成是陽性擴增條帶，造成假陽性。反之，造成假陰性。本試劑盒通用T載體引物在未插入片段時的距離至少有150bp以上，加上插入片段的長度，可以清晰的區分是插入片段擴增出的條帶還是引物二聚體擴增出的條帶。避免假陽性或者假陰性，大大提高了準確性。本公司研發的一管便攜式PCR MasterMix預混系統，無需您一一加入各種成分，直接加入需篩選單菌落，經過1小時左右的PCR反應和電泳檢測即可得到重組菌落鑒定的結果。

試劑盒組份(400次)：
2 × Taq PCR MasterMix——————5ml
Universal primer F————————250μl
Universal primer R————————250μl
ddH2O———————————————5ml

注意事項：
1. 重組菌落鑒定時，挑取單菌落前，應先做好標記，便于鑒定后使用。
2. 挑取菌落時，應選擇單菌落，不要挑取太多菌體，以免影響PCR 結果。
3. 設定PCR 程序時，請根據插入片段大小決定延伸時間，如果插入片段大小為1 kb以下，延伸時間30-45 秒即可，如果片段更長，可按此比例增加延伸時間。

儲存條件：-20℃。

本制品別名：T載體陽性克隆檢測試劑盒

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規格：1mL
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儲存條件：低溫運輸，4℃保存，有效期兩年。

名稱：DNA磷酸化試劑盒
貨號：BTN130813
規格：20次
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基團而不是-PO4基團(除非額外付費要求在人工合成時加上-PO4基團)，而任何DNA連接酶都不能將一個DNA分子5′端的-OH基團和另一個DNA分子3′端的-OH基團進行連接，因此通過人工合成的DNA片段和天然DNA 之間的連接效率一般都比天然DNA 彼此的連接效率低(天然DNA 4個端口均可連接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2個端口可以連接，人工合成的DNA之間沒有任何端口可以連接)，尤其是在平末端連接時。本公司開發的DNA 磷酸化產品能將DNA分子5′端的-OH基團磷酸化。

產品特點：
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基團變成-PO4基團，使人工合成的DNA(包括PCR產物)跟天然DNA一樣有高的連接效率。
2. 既可以對單鏈DNA進行磷酸化處理，也可以對雙鏈DNA片段同時磷酸化處理。
3.處理后的DNA可以直接用于連接反應、克隆等，不需要純化。
4. 本產品足夠20次DNA的磷酸化實驗。

成分	規格
10×TPK緩沖液	50μl
ATP溶液(10mM)	100μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為6個月。

使用方法：

一：雙鏈DNA片段(5′端為-OH基團的)的磷酸化
注意：如果是PCR產物，一定要先膠回收，不能使用沒經過純化的PCR反應液，因為其中的殘留PCR引物會耗掉大量的激酶，降低PCR產物的磷酸化效率。
1、在微量離心管中配制下列反應液(20μL)：

成分	用量
PCR膠回收片段	2μL(不超過10pmol)
10×TPK緩沖液	2μl
ATP溶液(10mM)	5μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超純水到	20μl

2、37℃反應30分鐘。
3、70℃熱處理5分鐘，滅活酶。
4、可直接用于后續克隆(加入量不要超過總體積的1/5)。

二：單鏈DNA片段的磷酸化
注：單鏈DNA 包括局部雙鏈的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探針等均按此操作處理。
5、在微量離心管中配制下列反應液(20μL)：

成分	用量
單鏈DNA片段	5-10 pmol
10×TPK緩沖液	2μl
ATP溶液(10mM)	1μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超純水到	20μl

6、37℃反應30分鐘。
7、70℃熱處理5分鐘，滅活激酶。
8、可直接用于后續克隆(加入量不要超過總體積的1/5)。如果使用濃度高，則可能需要乙醇沉淀法濃縮DNA。如果單鏈DNA的濃度低于5pmol，還需要在乙醇沉淀時加入核酸助沉劑。沉淀得到的DNA可溶解在適量的水中。

附：乙醇沉淀濃度DNA(本試劑盒不提供相關試劑，下列操作僅供參考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍體積的3 M 乙酸鈉溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍體積的無水乙醇和4uL 核酸助沉劑。
3、混勻后12000g 4℃離心10分鐘，小心棄上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暫離心3分鐘后小心棄上清。
5、短暫離心5秒，吸棄殘留液體(約30-50μL)。
6、室溫放置2分鐘干燥后加入適量的超純水溶解DNA，立即使用或放-20℃長期保存。

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