ALH015 全血總RNA提取試劑盒

產品簡介
全血總RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持,本品用于科研目的,本品質量穩定,價位合理,需要全血總RNA提取試劑盒等RNA提取純化產品的客戶,請到我公司官網聯系我們。...
產品詳細介紹
特別提示:包括全血總RNA提取試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:全血總RNA提取試劑盒
英文名稱:Total RNA Extraction Kit From Blood
產品貨號:ALH015
產品規格:20次|50次
本試劑盒使用紅細胞裂解液選擇性裂解紅細胞,然后獨特的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解白細胞和滅活細胞RNA酶,然后用乙醇調節結合條件后,RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜, 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物,蛋白等雜質去除, zuì后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。
產品組分:
| 組份 | 20次 | 50次 |
| 10X紅細胞裂解液RLB | 10ml | 25ml |
| 裂解液RLT | 25ml | 50ml |
| 去蛋白液RW1 | 15ml | 25ml |
| 漂洗液RW | 5ml | 10ml |
| RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
| 70%乙醇 | 4ml RNase-free H2O | 9ml RNase-free H2O |
| 吸附柱和收集管 | 20套 | 50套 |
產品特點:
1.離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚,氯fǎng等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。
3.反復優化的紅細胞裂解液配方,裂解效果快速完全。
4.快速,簡捷,單個樣品操作一般可在40分鐘內完成。
5.多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達1.9~2.0,基本無DNA殘留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各種實驗。
儲存條件:室溫,有效期12個月。
注意事項
1. 次使用前請先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入量乙醇,加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!
2. 所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉速可以達到13000rpm的傳統臺式離心機,如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
3. 需要自備乙醇, β-巰基乙醇,一次性注射器,研缽。
4. 裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5. 預防RNase 污染,應注意以下幾方面:
1) 經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌,可能導致RNase 污染。
2) 使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液RLT 中時不會被RNase 降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小時,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘,然后用水徹底清洗,再滅菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液應使用無RNase 的水。(將水加入到干凈的玻璃瓶中,加入DEPC 至終濃度0.1%( v/v),37℃放置過夜,高壓滅菌。)
6. 關于DNA 的微量殘留:一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA 的微量殘留,本公司的RNA提取產品,由于采取了本公司獨特的緩沖體系和選擇了特殊吸附能力的吸附膜,在大多數RT-PCR 擴增過程中其微量的DNA 殘留(一般電泳EB 染色紫外燈下觀察不可見)影響不是很大, 如果要進行嚴格的mRNA 表達量分析如熒光定量PCR,我們建議在進行模板和引物的選擇時:
1) 選用跨內含子的引物,以穿過mRNA 中的連接區,這樣DNA 就不能作為模板參與擴增反應。
2) 選擇基因組DNA 和cDNA 上擴增的產物大小不一樣的引物對。
3) 將RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 處理。本試劑盒還可以用于DNase I 處理后的RNA 清潔,請聯系我們索取具體操作說明書。
4) 在步驟去蛋白液RW1 漂洗前,直接在吸附柱上進行DNase I 處理。請聯系我們索取具體操作說明書。
7. RNA 純度及濃度檢測:
完整性: RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件:膠濃度1.2%;0.5×TBE 電泳緩沖液;150v,15 分鐘)檢測完整性。由于細胞中70%-80%的RNA 為rRNA,電泳后UV 下應能看到非常明顯的rRNA 條帶。動物rRNA 大小分別約為5 kb 和2kb,分別相當于28S 和18S rRNA。動物RNA 樣品中zuì大rRNA 亮度應為次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍,否則表示RNA 樣品的降解。出現彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴重降解。
純度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的RNA,OD260/OD280 讀數(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA 樣品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數1.8-2.1 之間,在水溶液中所測讀數則可能在1.5-1.9之間,但這并不表示RNA 不純。
濃度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀釋n 倍,用RNase-free 水將分光光度計調零,取稀釋液進行OD260, OD280 測定,按照以下公式進行RNA濃度的計算:終濃度(ng/μl)= (OD260)×(稀釋倍數n)×40
本制品別名:血液RNA提取試劑盒|全血RNA提取試劑盒|血液總RNA提取試劑盒|血液總RNA純化分離試劑盒
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試劑盒特點:
1.一管式操作,避免了可能的交叉污染和樣品RNA的丟失。
2.含一步離心式脫蠟試劑,不需要使用有毒的二甲苯,健康環保。
3. 能有效去除基因組DNA的污染,得到的RNA可直接用于RT-PCR反應。
4. 即開即用,客戶自己不需要準備額外的試劑。
試劑盒組成:
| 成分 | 規格 |
| 溶液A | 30mL |
| 溶液B | 3mL |
| 溶液C | 5mL |
| 溶液D | 15mL |
| 微量核酸沉淀劑 | 30mL |
| RNase-free水 | 10mL |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:低溫運輸,4℃保存(溶液C需要-20℃放置),有效期一年。
使用方法:
1. 將5片厚度為6-8μM的石蠟包埋組織切片轉移到1.5mL塑料離心管(zuì好使用螺旋蓋離心管)中并加入1mL溶液A,在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
2. 加入75μL溶液B,在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
3. 7000×g室溫離心2分鐘,溶液將形成兩個相,其中組織切片位于下相。
4.小心吸棄上層液體。
5. 將離心管放入真空離心機中抽干下層的液體,一般需要一小時。
6. 加入150μL溶液C,55℃保溫過夜。
7. 短暫離心,95℃保溫10分鐘。
8. 加入0.5mL溶液D,充分震蕩半分鐘。
9. 加入0.1mL自備氯fǎng,振蕩器上充分振蕩混均30秒。
10. 13000-5000×g室溫離心3~5分鐘。
11. 將上清液(約0.6mL)轉移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機相(藍色)和中間層含有DNA和蛋白質,避免觸及,否則將產生蛋白質和DNA污染。為保險起見,可以留下100μL上清液不取。同時吸取上清時zuì好緩慢進行,否則容易吸出交界面的不可見的DNA。
12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑,振蕩器上振蕩30秒混勻。
13. 13000-15000g室溫離心5分鐘,離心底的側面將形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率,可以將離心時間延長到20或30分鐘。
14.小心吸棄上清液,注意不要吸棄RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL自備的75%乙醇,振蕩混勻30秒。
16. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
17.小心吸棄上清液,注意不要吸棄RNA沉淀。
18. 短暫快速離心,用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
19.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使RNA沉淀過于干燥,否則RNA將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的電泳檢測:
21. RNA產量產率測定:將5-10μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL),進而計算出RNA的產量(濃度×體積)和產率(RNA產量/組織用量)。
22. RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染,但一般不影響RT-PCR等反應。
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