細(xì)胞活力的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞凋亡與增殖產(chǎn)品，本制品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要細(xì)胞活力等細(xì)胞凋亡與增殖產(chǎn)品的客戶，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括細(xì)胞活力(活死細(xì)胞染色)檢測(cè)試劑盒(Calcein AM，PI法，適用于FACS、FM)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞活力(活死細(xì)胞染色)檢測(cè)試劑盒(Calcein AM，PI法，適用于FACS、FM)
英文名稱：Live & Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Cells 說(shuō)
產(chǎn)品貨號(hào)：KFS337
產(chǎn)品規(guī)格：1000T

本試劑盒為動(dòng)物細(xì)胞死活檢測(cè)提供了雙色熒光染色方法。本試劑盒采用兩種廣泛常用的熒光探針，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)酯酶活性和質(zhì)膜完整性兩個(gè)方面反映細(xì)胞活力。本試劑盒適用于熒光顯微鏡、熒光多孔板、掃描儀、流式細(xì)胞儀以及其他熒光檢測(cè)系統(tǒng)。本試劑盒可以應(yīng)用于大多數(shù)的真核哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括貼壁細(xì)胞核某些組織，但不適用與細(xì)菌、酵母。該方法更快捷安全且靈敏度更高。

原理：在鈣黃素AM 存在活細(xì)胞內(nèi)時(shí)，其特點(diǎn)就是由于胞內(nèi)無(wú)所不在的酯酶活性作用，由幾乎無(wú)熒光、具有細(xì)胞膜透性的鈣黃素AM生成具有強(qiáng)烈熒光信號(hào)的綠色熒光物質(zhì)（Ex/Em：495nm/520nm）。而對(duì)于受損的細(xì)胞膜來(lái)說(shuō)，碘化丙啶(PI)可以傳過(guò)進(jìn)入細(xì)胞，與核酸結(jié)合，熒光信號(hào)從而放大40 倍，產(chǎn)生一個(gè)明亮的紅色熒光信號(hào)的死細(xì)胞（Ex/Em：530nm/620nm）。

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名稱：XTT細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：BTN140635
規(guī)格：500次
XTT能被活細(xì)胞里的線粒體脫氫酶降解而產(chǎn)生橙黃色水溶性的甲臜，通過(guò)測(cè)定甲臜的光譜吸收，進(jìn)而可以測(cè)定細(xì)胞的增殖情況。XTT與MTT同屬四唑氮衍生物，它們檢測(cè)細(xì)胞活性的反應(yīng)原理相似，原理圖如下：


產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．盒靈敏度，可檢測(cè)低細(xì)胞密度樣品，檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性優(yōu)于MTT。
2．操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí)，無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞，免去溶解步驟。
3．無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物，也不需要處理廢棄物。
4．與MTT相比，使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲基產(chǎn)物。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
說(shuō)明書	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運(yùn)輸和保存)，有效期一年。

使用方法：
下面操作是檢測(cè)細(xì)胞毒性的試驗(yàn)，其他應(yīng)用跟此類似或更簡(jiǎn)單(如生長(zhǎng)曲線試驗(yàn))，操作步驟可以以此為基礎(chǔ)稍作修改即可，故不再贅述。

㈠、接種細(xì)胞
1．按常規(guī)胰酶消化法消化匯合的單層細(xì)胞，收集到含血清的培養(yǎng)基中。
2．200g離心5分鐘收集細(xì)胞沉淀。
3．用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸浮液并計(jì)數(shù)。
4．將細(xì)胞稀釋到2.5×103個(gè)/mL～5×10個(gè)/mL之間(需要根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度決定)，如果不知道生長(zhǎng)數(shù)度，一般可以稀釋到1×10個(gè)/mL。
5．將足夠量的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中(便于用排槍取樣)。一個(gè)96孔板的MTT檢測(cè)需要約20mL的細(xì)胞懸液。
6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細(xì)胞懸液(對(duì)正常細(xì)胞)。如果是腫瘤細(xì)胞，則加入100μL腫瘤細(xì)胞懸液和100μL培養(yǎng)基(總體積為200μL)。
 注意：一定要把細(xì)胞加在孔的正中，否則細(xì)胞會(huì)聚集在孔的角落處，影響試驗(yàn)。
7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細(xì)胞懸液等體積的培養(yǎng)基。第1 列各孔將作為+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT對(duì)照(用于測(cè)OD時(shí)調(diào)零)，第12列加培養(yǎng)基的作用是減少邊緣效應(yīng)對(duì)第11列反應(yīng)的影響。
8．按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期。

㈡、藥物處理
9．用培養(yǎng)基將藥物稀釋到8個(gè)待測(cè)濃度(如果不知道待測(cè)濃度，則需要預(yù)試驗(yàn)確定)，一般一種藥物需要做3塊平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養(yǎng)基(不要觸動(dòng)細(xì)胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培養(yǎng)基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養(yǎng)基，這些孔將作為+培養(yǎng)基+細(xì)胞-藥物的對(duì)照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個(gè)濃度梯度的待測(cè)藥物，每列加入一個(gè)濃度的藥物。
13．按常規(guī)方法把96孔板繼續(xù)放在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時(shí)間，此段時(shí)間即為藥物處理細(xì)胞的時(shí)間，由用戶自己決定。
14．處理結(jié)束后去除第2到第11列(共10列，均含細(xì)胞)所有孔中的培養(yǎng)基，并再加入100μL新鮮培養(yǎng)基。
15．每天換培養(yǎng)使細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增2-3倍(所需時(shí)間隨細(xì)胞不同而不同)。

㈢、存活細(xì)胞計(jì)數(shù)
16．在生長(zhǎng)末期，去除第1到第11列各孔中的培養(yǎng)基后，再加入100μL新鮮培養(yǎng)基和10μL溶液A(含MTT成分)，用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)4-8小時(shí)。
 注意：溶液A在低溫情況下會(huì)凝固，使用前請(qǐng)室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解，搖勻后使用。MTT有致癌性，一定要帶手套操作。
17．小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基(含溶液A)。由于培養(yǎng)基可能會(huì)影響光吸收，zuì好盡可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置搖床上低速振蕩10分鐘，使MTT形成的formazan結(jié)晶物充分溶解。
19．由于產(chǎn)物不穩(wěn)定，故需要立即在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上選擇490nm測(cè)定吸光度。
 注意：用第1 列各孔(+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT對(duì)照)調(diào)零。
20．計(jì)數(shù)同樣處理的各次重復(fù)的平均值。
21．以藥物濃度為橫軸，以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度值差別很大，一般需將其轉(zhuǎn)化成生長(zhǎng)抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數(shù)據(jù)的平均數(shù)作為)，這樣便于計(jì)算出IC50，用于各種藥物處理效果的比較。
 注意：如果測(cè)生長(zhǎng)曲線，則以時(shí)間為橫軸。正常生長(zhǎng)曲線一般呈現(xiàn)S型，具有促進(jìn)作用的則斜率加大。

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