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產(chǎn)品詳情

GL2491 葉綠體分離試劑盒

  • 產(chǎn)品/服務:GL2491 葉綠體分離試劑盒
  • 型 號:GL2491
  • 品 牌:百奧萊博
  • 單 價:面議 
  • 更新日期:2023-06-05
  • 有效期至:長期有效
  • 瀏覽次數(shù):1474
產(chǎn)品簡介

葉綠體分離試劑盒由專業(yè)試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科研目的,葉綠體分離試劑盒是我司眾多優(yōu)質(zhì)亞細胞結(jié)構(gòu)研究之一,質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品,價格非常優(yōu)惠,目前正熱烈促銷中,恭候您的咨詢訂購。...

產(chǎn)品詳細介紹

特別提示:包括葉綠體分離試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!


產(chǎn)品名稱:葉綠體分離試劑盒
產(chǎn)品貨號:GL2491
產(chǎn)品規(guī)格:50T|100T

用途:
葉綠體分離試劑盒(Chloroplast Isolation Kit )又稱葉綠體提取試劑盒,適用于從植物葉片(菠菜、豌豆、生菜、卷心菜、莙達菜和煙草等)中分離葉綠體以便進行結(jié)構(gòu)和功能研究

注意事項:
采用易于執(zhí)行的簡單、成熟實驗方案,節(jié)省時間, 分離出來的葉綠體可適于研究碳同化、電子流和磷酸化、代謝轉(zhuǎn)運或蛋白質(zhì)靶向等過程,其提取原理是研磨葉片得到的勻漿液,經(jīng)過濾、離心可獲得葉綠體,置于等滲緩沖液中檢測其完整性。

儲存條件:4℃,避光,12個月

根據(jù)您的關(guān)注的葉綠體分離試劑盒,您可能還對以下產(chǎn)品有需求:



名稱:細胞核微量制備試劑盒
貨號:BTN100601
規(guī)格:50次
用高密度介質(zhì)來分離動物軟體組織(如肝臟、脾臟等)細胞核是目前主流的方法,它是由Chauveau于1956年發(fā)明,其原理是細胞核的密度較大,在高速離心條件下(40000g 1小時)可在高密度介質(zhì)(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下來,從而達到與細胞質(zhì)其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細胞核,得到廣泛應用。本產(chǎn)品就是在Chauveau方法的基礎上優(yōu)化改進而來。

產(chǎn)品特點:
1.基于密度梯度分離,可有效去除細胞質(zhì)及其他細胞器,得到的細胞核純凈。
2.加進氯化鈣、氯化鎂、氯化鉀等改變分離介質(zhì)滲透壓的物質(zhì),減少了細胞核的脆性,增加了細胞核的完整性。
3.精心調(diào)節(jié)了介質(zhì)的pH,防止細胞核在分離過程中的聚集,還能保持細胞核的精細結(jié)構(gòu)。
4.快速,整個操作過程僅需1小時即可完成(對一個樣品而言)。
5.提供染色試劑,可以在普通光學顯微鏡下檢測純化的細胞核的純度。
6.處理溫和,得到的細胞核中的大部分蛋白質(zhì)都具有活性,可以用于膠遲阻實驗、酶活性分析細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究;也可用于片段DNA的純化。
7.不但適用于動物和植物培養(yǎng)細胞,還能用于實體組織(能用Dounce或Potter 勻漿器勻漿的組織均可)。
8.一次微量提取足夠處理0.1 克組織或10E7個培養(yǎng)細胞,本產(chǎn)品足夠50次微量提取。

試劑盒組成:
成分 規(guī)格
溶液A成分一 100ml
溶液A成分二(干粉) 約20g
溶液B成分一 50ml
溶液B成分二(干粉) 約100g
細胞核染色液 1套
說明書 1份


儲存條件:常溫運輸和保存,有效期一年。

使用方法:

一、準備工作:先將溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中,搖晃溶解后得到100mL溶液A。將溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中,搖晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超過2 天,長期放置需要放-20℃。

二、微量細胞核分離(放量提取各試劑的用量可以按比例放大):
1.對組織細胞:稱取100~200mg 新鮮組織(如動物肝臟、腦、心肌和植物葉片等),用自備的PBS或生理鹽水洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀或刀片將其剪為碎塊(zuì好大小為1cm3,過小反而不利于勻漿)放入小容量Dounce或Potter 玻璃勻漿器內(nèi)。
2.對培養(yǎng)細胞:用自備胰酶按標準方法消化培養(yǎng)細胞,PBS 洗滌,800×g 5~10分鐘離心收集細胞,計數(shù)。每次微量提取需要5×10E7個細胞,加入1.0mL預冷的溶液A重懸細胞,然后轉(zhuǎn)移到小容量Dounce或Potter 玻璃勻漿器內(nèi)
3.用Dounce或Potter 組織勻漿器在冰上破碎組織或細胞。如果用手動勻漿器,一般需要20~30次。如果用電動勻漿器,一般需要處理3-5次,每次5~10秒鐘(轉(zhuǎn)速為500r/min)。
4.將勻漿液轉(zhuǎn)移到離心管中。如果勻漿液有可見的結(jié)締組織和未破碎的組織塊,可以用三層自備的紗布放在1.5mL離心管管口,將勻漿液過濾進入離心管??扇∩倭繛V液涂在載玻片上制得涂片A,自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
5.4℃,700-800×g 水平離心5-10分鐘。細胞核沉淀在收集管底部,棄上清??扇∩倭可锨逡和吭谳d玻片上制得涂片B,自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
6.加入0.5mL預冷溶液A重懸沉淀。用預冷的勻漿器(用前需要將表面的組織洗去)重懸沉淀??扇∩倭可锨逡和吭谳d玻片上制得涂片C,自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
7.在水平型離心管中加入0.5mL預冷的溶液B,然后靠管壁慢慢加入上步得到的重懸液。
8.在4℃ 23000g離心30分鐘,管底的沉淀即為細胞核。
9.小心吸棄上清液。注意:上清一般比較粘稠,zuì好倒立一段時間。
10.用0.5mL溶液A重懸沉淀。
11.在4℃ 1500g離心5分鐘,吸棄上清,沉淀即為純凈的細胞核??梢灾苯邮褂?,也可以加等體積的自備甘油,混勻后放液氮或-70℃保存。可取少量上懸浮液涂在載玻片上制得涂片D,自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
12.用本方法一般可以從0.1g 肝臟組織中純化到1-2×107個細胞核。如果后續(xù)試驗是Western Blot和2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核后上樣。

三、顯微鏡檢測涂片,計算效率
1.將干燥后的A-D 四張涂片加入固定液固定15分鐘,晾干。
2.Giemsa 染液染10分鐘。
3.自備蒸餾水漂洗數(shù)秒,用濾紙吸干水。
4.用顯微鏡(40×)檢查涂片,細胞核將呈紫紅色,混雜的細胞質(zhì)為淺藍色碎片。根據(jù)每步細胞核的數(shù)量可以粗略估計回收效率。

疑難解答:
本說明書強烈建議用離心力g 而不是轉(zhuǎn)速計算所需的離心速度,因為不同的離心機轉(zhuǎn)子直徑不同,即使是同一轉(zhuǎn)速,其離心力也不同。如果只知道轉(zhuǎn)速,可用下式計算離心力。
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來表示;[rpm]2即轉(zhuǎn)速的平方;
R為離心機轉(zhuǎn)子的半徑(單位為厘米)。

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