內質網提取試劑盒(低速離心法)只需要達到20000×g以內的離心力即可提取內質網，一般的常規臺式離心機均可以滿足使用要求。本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內質網蛋白的提取。...

內質網提取試劑盒(低速離心法)

 

產品編號：HR9087

產品組成：

內質網提取試劑盒(低速離心法)儲存條件：

2-8℃保存，有效期1年。

產品簡介：

內質網存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內質網為由生物膜構成的互相通連的片層隙狀或小管狀系統，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質之間不直接相通。這種細胞內的膜性管道系統一方面構成細胞內物質運輸的通路，另方面為細胞內各種各樣的酶反應提供廣闊的反應面積。內質網的功能與蛋白質的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關，并且還具有運輸蛋白質的功能。

傳統的內質網提取方法需要采用較高的離心力或者采用密度梯度離心，對實驗室離心機設備要求較高，對實驗的操作細致程度要求較高。如果實驗室沒有能達到50000×g以上的離心力的設備，則沒法進行提取。

內質網提取試劑盒(低速離心法)只需要達到20000×g以內的離心力即可提取內質網，一般的常規臺式離心機均可以滿足使用要求。

本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內質網蛋白的提取。

試劑盒以外自備試劑耗材和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有，也可用普通玻璃勻漿器勻漿，但是內質網回收率會下降。

使用方法：

內質網提取試劑盒(低速離心法)細胞內質網提?。?

1、取1～2×10⁷個細胞，在4℃，500×條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞；

2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

3、加入500μL冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4、用Dounce勻漿器勻漿充分勻漿，然后在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6、將上清在4℃，11000×g力條件下離心10分鐘。

7、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8、將上清在4℃，12000-16000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL試劑B，充分混勻。

【注】：

● 試劑B 使用前請充分混勻。

10、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

11、在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即為內質網。

組織內質網提取：

1、取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2、用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。

3、加入500μL冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4、用Dounce勻漿器充分勻漿30-40下，至無明顯固體團塊。然后4℃,1000×g力條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6、在4℃，11000×g力條件下離心10分鐘。

7、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8、將上清在4℃，12000-16000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL試劑B，充分混勻。

【注】：

● 試劑B使用前請充分混勻。

10、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

11、在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即為內質網。

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