在激發波長488 nm，發射波長520 nm附近，使用熒光分光光度計、熒光酶標儀、等檢測DCFHDA產物熒光，從而測定組織內活性氧水平。一般最好使用新鮮組織樣本檢測活性氧，反映的是組織當時的活性氧狀態。凍存的組織樣本的ROS在長期凍存過程中會損失掉，有條件的話就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的樣本。已經凍存的組織樣本中殘...

組織活性氧檢測試劑盒(DCFHDA)

 

產品編號：HR9079

產品組成：

儲存條件：

勻漿液2-8℃保存；探針-20℃避光保存。有效期6個月。

【注】：

● 染料2周內可2-8℃保存，長期不用可以-20℃保存。避免反復凍融。

● 探針為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

組織活性氧檢測試劑盒(DCFHDA)產品簡介：

活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，參與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。

組織活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針DCFHDA進行組織活性氧檢測的試劑盒。本試劑盒中的DCFHDA ROS探針為綠色熒光的活性氧探針，具有488/520nm的最大激發/發射波長。

DCFHDA ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成綠色熒光物質，綠色熒光強度與組織內活性氧水平成正比，檢測DCFHDA產物的熒光就可以知道組織內活性氧的水平。

在激發波長488 nm，發射波長520 nm附近，使用熒光分光光度計、熒光酶標儀、等檢測DCFHDA產物熒光，從而測定組織內活性氧水平。

一般最好使用新鮮組織樣本檢測活性氧，反映的是組織當時的活性氧狀態。凍存的組織樣本的ROS在長期凍存過程中會損失掉，有條件的話就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的樣本。已經凍存的組織樣本中殘余的ROS也可以用本試劑盒檢測。

產品特點：

● 使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標儀檢測；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：

● 熒光分光光度計 ● 熒光酶標儀

樣本類型：

● 新鮮組織 ● 凍存組織

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光分光光度計/熒光酶標儀 ● PBS/HBSS(無酚紅) ● 蛋白定量試劑盒 ● 熒光檢測專用黑色96孔板

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● DCFHDA探針染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。

使用方法：

試劑準備：

根據樣本數量，用純水將DCFHDA探針10倍稀釋。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現配現用。

組織活性氧檢測試劑盒(DCFHDA)樣本處理：

1、剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。

2、準確稱取50-100mg組織，加入1mL勻漿緩沖液A，用勻漿器/勻漿機充分勻漿。

3、在100×g，4℃離心3分鐘，棄沉淀，取上清。

樣本檢測：

1、在96孔板中加入190μL勻漿上清液、10μL DCFHDA探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

2、在37℃避光孵育30分鐘。

3、置于熒光酶標儀中，后于激發波長為488nm、發射波長530nm檢測熒光強度。

【注】：

● 或使用熒光分光光度計等其他熒光檢測設備。

● 必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。

● 如熒光強度太強，超過了儀器的檢測范圍，可將孵育后的勻漿上清液稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。

蛋白定量：

1、另取50μL上清勻漿液，用PBS大約稀釋30倍。

2、取100μL進行蛋白定量。

結果處理：

以熒光強度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氧強度。

【注】：

● 數據與蛋白濃度的單位無關。

● 此處以蛋白濃度數據作為校正系數，對不同樣品進行均一化處理。

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