線粒體是真核細胞中產生能量的重要細胞器。細胞中的能源物質—脂肪、糖、部分氨基酸在此進行最終的氧化,并通過偶聯磷酸化生成ATP,供給細胞生理活動之需。對線粒體結構與功能的研究通常是在離體的線粒體上進行的。...

酵母線粒體提取試劑盒

 

產品編號：HR0257

產品組成：

保存條件：

2-8℃保存；酵母洗滌液長期不用時-20℃保存。有效期1年。

酵母線粒體提取試劑盒產品說明：

線粒體是真核細胞中產生能量的重要細胞器。細胞中的能源物質—脂肪、糖、部分氨基酸在此進行最終的氧化,并通過偶聯磷酸化生成ATP,供給細胞生理活動之需。對線粒體結構與功能的研究通常是在離體的線粒體上進行的。

本產品提供全套試劑,適用于從各種酵母樣品中提取線粒體。提取過程簡單方便。

本試劑盒不能用于冷凍樣品的線粒體提取。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液

酵母線粒體提取試劑盒使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

使用方法：

1、酵母培養物,在4℃,1000×g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養基,盡可能吸干,收集酵母沉淀。

2、用PBS洗滌酵母兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

● 在1000×g離心5分鐘。

3、每100μL體積或100mg濕重酵母沉淀物中加入400μL酵母線粒體提取液A,混勻后,在30℃條件下保溫15 分鐘。

【注】：

● 酵母數量根據實驗情況調整,每次的裂解液用量并不是一定的,請根據實際情況調整。

4、在1000×g條件下離心5-10分鐘,收集酵母沉淀。

5、用300μL酵母洗滌液D洗滌酵母一次,離心收集酵母。

6、酵母沉淀物中加入500μL酵母線粒體提取液B,充分混勻。

【注】：

● 根據酵母細胞量調整提取液用量,一般加菌體體積的2-5倍均可。

● 按酵母菌體體積每100μL或100mg濕重菌體加入250-500μL提取液。

7、在37℃或室溫條件下輕微振蕩60-90分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速,提取液能輕微晃動即可。

● 如果沒有振蕩條件也可以不振蕩,稍微延長提取液的處理時間,中間每隔10分鐘用移液器吹打混勻。

● 不用酵母樣本需要的時間差異較大,根據下游細胞裂解的難易程度調整,如果下游試劑C處理后沉淀沒有明顯減少,需要延長此步驟處理時間。可以延長至2小時。

8、在2000×g條件下離心5-10分鐘,棄上清,收集沉淀。

9、沉淀用300μL酵母洗滌液D洗滌兩次。離心收集沉淀。

10、在沉淀中加入400μL酵母線粒體提取液C,充分混勻,然后在振蕩器上振蕩10-30分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速,保持提取液能輕微晃動即可。

● 如果沒有振蕩器的話,在4℃靜置,稍微延長處理時間,中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

● 試劑C處理后沉淀應減少,否則延長處理時間。

11、在4℃,500×g條件下離心5分鐘。棄沉淀,收集上清。

12、將上清吸入另一干凈離心管。

13、在4℃,12000×g以上條件下離心20分鐘。棄上清,收集沉淀。

14、在沉淀中加入400μL線粒體保存液E,混勻。

15、在4℃,12000×g條件下離心20分鐘,棄上清,收集沉淀。即得到酵母線粒體樣品。

16、根據下游實驗需要,將沉淀用相應的緩沖液重懸。置冰箱備用或直接用于下游實驗。

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