寡聚核苷酸Oligo(dT)15由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多寡聚核苷酸Oligo(dT)15等核酸擴增(PCR)產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括寡聚核苷酸Oligo(dT)15在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：寡聚核苷酸Oligo(dT)15
英文名稱：Oligo(dT)15
產(chǎn)品貨號：WE0161
產(chǎn)品規(guī)格：50μl

  本產(chǎn)品是15個胸腺嘧啶組成的寡聚核苷酸，濃度為100μM，由mRNA合成cDNA時作為反轉(zhuǎn)錄引物使用。

質(zhì)量控制：
1、HPLC分析確認(rèn)純度。
2、1 nmol 的本制品和2 ug 的5S rRNA，在37℃條件下反應(yīng)24小時，RNA的電泳圖像不發(fā)生改變。

使用方法：
使用時直接將Oligo(dT)15直接加入到反應(yīng)體系中即可，建議每20μl體系中加入Oligo(dT)15 1μl。

儲存條件：-20℃。

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BTN70905 2%明膠溶液(PCR級) 1.5mL
BTN101005 即用型易錯PCR試劑盒 100次
BTN90408 即用型熒光定量PCR試劑盒 1mL
BTN131227 10nt隨機引物(0.5μg/uL) 250
BTN91202 雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq) 50次
YT372 Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer) 200U|1000U
WE0118 結(jié)核分枝桿菌基因分型試劑盒(VNTR-9) 50次

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名稱：即用型易錯PCR試劑盒
貨號：BTN101005
規(guī)格：100次
本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯PCR而開發(fā)。易錯PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。

產(chǎn)品特點：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的優(yōu)越性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，突變率穩(wěn)定，突變沒有趨向性。易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單，但如果在PCR引物中設(shè)計位點，則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體，也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4.可用于連續(xù)易錯PCR，只需把上一次易錯PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增1kb以下的產(chǎn)物，對于1kb以上的產(chǎn)物，建議分段擴增。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯PCR Mix，10×	300μl
易錯PCR專用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為一年。

使用方法：
1.以30μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例，如果反應(yīng)體系不是30μL，各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分：

易錯PCR Mix,10×	3μl
易錯PCR 專用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自備DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自備，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
補水到	30μl

2. 按已經(jīng)優(yōu)化的PCR條件進行一定循環(huán)數(shù)的PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件：

PCR前變性	94℃ 3分鐘
易錯PCR	94℃ 1分鐘	循環(huán)30次(見注)
	45℃ 1分鐘
	72℃ 1分鐘

注：易錯PCR一般不需要熱啟動，也不需要在PCR結(jié)束后做延伸處理。

循環(huán)次數(shù)與突變幾率的關(guān)系
易錯PCR循環(huán)次數(shù)決定每個核苷酸位置的突變幾率，進而決定每個PCR產(chǎn)物可能得突變位點數(shù)，所以所需循環(huán)數(shù)由客戶根據(jù)需要改動。

PCR循環(huán)數(shù)	每個堿基突變幾率	PCR終產(chǎn)物中的突變位點數(shù)
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.電泳檢測是否得到預(yù)計長度的PCR產(chǎn)物。

疑難解答：
Q：易錯PCR與定點突變PCR有什么區(qū)別？
A：定點突變是指通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組，也可以是質(zhì)粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化)，包括堿基的添加、刪除、點突變等。它需要預(yù)先知道靶基因的序列。易錯PCR是一種隨機突變，它不需要預(yù)先知道靶基因的序列(引物結(jié)合部分除外)，但需要后續(xù)的篩選方法篩選自己所需要的突變。
Q：易錯PCR的錯誤率是多少？
A：易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，對500bp的PCR產(chǎn)物，相當(dāng)于有4%的PCR片段為野生型，12%的含一個突變，20%的含兩個突變，22%的含三個突變，18%的含四個突變，12%的含五個突變，12%的含六個或更多突變。
Q：如果需要每個核苷酸有高于0.66%的突變率，如何辦？
A：可以使用連續(xù)多次易錯PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產(chǎn)物作為第二輪易錯PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產(chǎn)物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進行)。

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