BTN61203 PCR級高GC的DNA清除劑

產品簡介
PCR級高GC的DNA清除劑由專業試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科研目的,我公司的PCR級高GC的DNA清除劑品質上佳,經過多年的開發生產,已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括PCR級高GC的DNA清除劑在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:PCR級高GC的DNA清除劑
英文名稱:High GC DNA Scavenger
產品貨號:BTN61203
產品規格:1.5mL
本產品是我司開發的專門用于富含GC的DNA模板擴增的試劑。
產品特點:
1.,使用效果普遍好于常規的添加DMSO和甜菜堿的方法。
2.可以處理GC含量高達80%的DNA模板。
3. 操作簡單,將本產品用于溶解DNA沉淀即可使用。
儲存條件:常溫運輸及保存,有效期一年。
使用方法:
將乙醇沉淀的高GC DNA直接溶解在適量的本產品中,充分吹打均勻,然后直接將DNA加入PCR反應體系中進行PCR反應。加入的DNA溶液zuì好不要超過PCR終體積的1/10。剩余的DNA可以長期保存。
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| 貨號 | 名稱 | 規格 |
| BTN100814 | Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL) | 5μg |
| BTN101114 | 通用型RT-LAMP恒溫擴增試劑盒 | 50次 |
| YT373 | YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) | 200U|1000U |
| YT388 | dTTP溶液(100mM) | 250μl |
| YT390 | dNTP混合溶液(2.5mM) | 1ml |
| YT397 | cDNA鏈合成試劑盒II(RNase H-) | 20次|100次 |
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名稱:即用型熒光定量PCR試劑盒
貨號:BTN90408
規格:1mL
本產品是基于熒光染料檢測的即用型PCR試劑盒,可以對靶片段進行實時定量PCR分析。產品含有經過優化的緩沖液組分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及熒光染料DNAgreen等所有實時定量PCR所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進行實時定量PCR反應和HRM分析,具有廣泛的用途。
產品特點:
1. 方便,用戶只需準備模板和引物既可以進行實時定量PCR實驗和HRM(High Resolution DNA Melt Curve Analysis)分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix則不能同時用于上述兩種實驗。
2. 使用第三代飽和型熒光染料,信號強,不會抑制PCR反應。
3.快捷,即用型的預配液使加樣操作步驟大大簡化,避免了交叉污染,降低實驗誤差。
4. 各成分的濃度和比例都經過精心優化,反應的靈敏度高,特異性強。能檢測到濃度為50拷貝/mL的靶分子。
試劑盒組成:
| 成分 | 規格 |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μl |
| 易錯PCR Mix,10× | 300μl |
| 易錯PCR專用dNTP,10× | 300μl |
| MnCl2,5mM | 300μl |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,保存期限為6個月。
使用方法:
1.以20μl的qPCR反應體系為例:在一干凈的PCR管中,加入下列成分:
| 反應體系成分 | 20μl體系 | 終濃度 |
| qPCR MagicMix,2× | 10μl | 1× |
| 自備引物一 | xμl | 0.1-0.5μM |
| 自備引物二 | xμl | 0.1-0.5μM |
| 自備模板 | xμl | |
| 自備ROX | 2μl | (可以不加) |
| 補超純水到 | 20μl |
放入熒光PCR儀中進行擴增,并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。
注意:
a)通常引物濃度以0.2μm可得到較好結果,可以終濃度0.1-1.0μm作為設定范圍的參考;通常DNA模板的量以10-100 ng基因組DNA或1-10 ng cDNA為參照,因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數不同,可對模板進行梯度稀釋,以確定zuì佳的模板使用量。
b)ROX 校正染料:如果使用ABI公司的7500,7700和7900三種型號的熒光PCR儀器,則需用自備的ROX進行Ct值校正。對ABI 7700和7900,ROX的zuì佳濃度為1×(即在每20μl反應體系中加2μl 10×ROX)。對ABI 7500,ROX的zuì佳濃度為0.05-0.1×(每20μl反應體系加0.1-0.2μl 10×ROX;也可將10×ROX稀釋到1×,然后每個反應體系加入1-2μl 1×ROX)。ROX會在溶解曲線中產生噪音,因此,如果出現了雜峰,將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾,然后重新分析數據。
對于iCycler IQ,MJ Opticon,MJ Chromo4,MX3000,MX4000,RotorGene3000,RotorGene 6000和LightCycler 480等型號的熒光PCR儀器,ROX不是必須的,但加入的話也不會影響整個PCR分析。
2. 循環步驟:根據擴增子的性質和儀器性能,從以下三個過程中任選一個進行擴增。
兩步快速循環法:適用于引物Tm值設計為60℃的反應
| 循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
| 酶活化 | 95℃ | 10min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 15s | 35-40 |
| 退火&延伸 | 60℃ | 1min |
注意:本產品所采用的熱啟動酶須在預變性95℃、10 min條件下實現酶的活化。退火溫度請以60-64℃作為設定范圍的參考,發生非特異性反應時,可提高退火溫度。
三步快速循環法:適用于延伸步驟溫度高于退火步驟的PCR(長引物PCR)
| 循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
| 酶活化 | 95℃ | 10min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 10s | 35-40 |
| 退火 | 56-64℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 32s |
注意:
·退火溫度:建議采用兩步法PCR,退火溫度60℃進行反應。若提高反應特異性,可提高退火溫度,以60-64℃作為設定范圍的參考。若因使用Tm值較低的引物等原 因,得不到良好的實驗結果時,可嘗試進行三步法PCR擴增,三步法的退火溫度請以56℃-64℃的范圍作為設定參考。
·延伸溫度:延伸溫度設為72℃通常可以提高擴增效率。但是,對于AT含量大于70%的擴增子來說,延伸溫度設為60℃為宜。
通用循環法:這種循環方法適用于幾乎所有的熒光PCR儀,也適用于用快速循環法不能擴增的模版。
| 循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
| 酶活化 | 96℃ | 10min | 1 |
| 變性 | 96℃ | 15s | 35-40 |
| 退火&延伸 | 60℃ | 1min |
3. 數據采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在沒結合DNA時,zuì大吸收光譜在471nm,結合DNA時的zuì大吸收光譜在500nm,zuì大發射光譜在530nm。
注意事項:
1. 如果使用iCycler,可以不加入FAM。
2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛細管進行PCR,需加入終濃度為0.5mg/mL的自備BSA。
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