Caspase 8活性檢測試劑盒是高品質的細胞凋亡與增殖產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于生化實驗研究等領域，我公司的Caspase 8活性檢測試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括Caspase 8活性檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：Caspase 8活性檢測試劑盒
產品貨號：HR0430
產品規格：20T|50T|100T

Caspase 8活性檢測試劑盒(Caspase 8 Activity Assay Kit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中Caspase 8酶活性或純化的Caspase 8酶活性的試劑盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 8被認為是細胞凋亡信號轉導過程中比較上游的一個caspase。在Fas-receptor和TNFR-1 介導的細胞凋亡過程中caspase 8被激活，形成一個由p18和p10組成的二聚體，進一步激活下游的caspase4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。
本Caspase 8活性檢測試劑盒是基于casepase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA產生黃色的pNA，pNA在405nm 附近有強吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 3的活性。
本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養細胞或新鮮組織樣本的caspase-8檢測。

儲存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事項：
● 須自備可以測定 A405或A400的酶標儀或容量不超過100μl的分光光度檢測杯及相應分光光度計。優先考慮測定A405。
● 37℃下反應如果顏色變化不明顯，可以適當延長反應時間。
● 適合采用 Bradford法進行蛋白濃度測定。
● 如果樣品中蛋白含量低，裂解樣品時需設法使樣品中的蛋白濃度接近 1-3mg/ml。
● 如果樣品中激活的caspase水平很低，適當調節誘導細胞凋亡的時間，找一個caspase激活比較強的時間點進行檢測。
● Ac-IETD-pNA 避光保存，使用過程中盡量避光。
● Ac-IETD-pNA溶液凍存后可能產生沉淀，使用前請混勻。

使用方法：
一、裂解緩沖液和檢測緩沖液配制
根據待測樣品數準備裂解緩沖液和檢測緩沖液，每1ml緩沖液中加入10μl DTT。
二、樣品處理
A、細胞樣品
1．收集 2-5×106個細胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
2．用冷 PBS 洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3．在細胞中加入100μl冷的裂解緩沖液，高速渦旋振蕩15秒。
4．置冰上 15分鐘，每隔5分鐘高速渦旋振蕩15秒。
5．在 4℃，500×g條件下離心5分鐘。
6．快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存備用。
B．組織樣品
1．取適量組織樣本剪碎，按照 50mg/100μl冷的裂解緩沖液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體(或用液氮研磨)，冰上靜置15分鐘，小心將上清吸入另一預冷的干凈離心管。
2．在 4℃，500×g條件下離心5分鐘。
3．快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存備用。
三、對上述處理過的上清用Bradford法進行蛋白定量。
四、Caspase 8活性檢測
1．取10μl 大約含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl檢測緩沖液。
2．再加入10μl Ac-IETD-pNA(使用前請混勻)，在37℃下避光反應1-2小時，有黃色顏色產生即可進行檢測，如果顏色變化不明顯，時間可以延長，甚至孵育過夜。部分樣品中激活的caspase-8水平較低，顏色變化不明顯，直接上機檢測，與對照組樣品產品變化即可。
3．測定 A405nm或A400nm。
4．根據凋亡誘導的細胞的吸光值與空白對照細胞的吸光值的比值計算相對的Caspase 8活性程度。

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