一步法Western專用封閉液的品牌是百奧萊博，是優質的蛋白質研究產品，本制品用于科研目的，我公司的一步法Western專用封閉液品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括一步法Western專用封閉液在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：一步法Western專用封閉液
英文名稱：One Step Western Blocking Buffer
產品貨號：WE0296
產品規格：100ml

  Western Blot實驗中，為防止印跡膜與檢測系統中的蛋白成分(如抗體IgG等)發生非特異性吸附，導致實驗結果不清晰，通常在進行一抗孵育前需預先對印跡膜上的非特異結合位點進行封閉。本產品以奶粉為基礎，采用獨特配方，專用于百奧萊博一步法WB檢測中的封閉步驟，可快速地封閉膜上多余的結合部位，減少非特異結合情況的產生，降低背景，適用于各種轉印膜的封閉，操作方便快捷。另外，本產品特別添加了蛋白穩定劑，可保證每次實驗封閉效果穩定可靠。

注意事項：
1、每次使用時，必須保證封閉液將印跡膜完全浸沒，以免影響封閉效果。
2、本產品含有防腐劑，操作時請佩戴手套進行防護。
3、本產品僅用于科研，不能用于人體實驗或人體治療。

操作步驟：

1、本產品無需稀釋，開蓋即用。
2、目的蛋白轉移完畢后，將印跡膜放入容器中，加入適量One Step Western Blocking Buffer。
3、室溫孵育5分鐘。
4、封閉結束后棄去封閉液，進行一步法Western Blot后續操作。

儲存條件：2～8℃

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貨號	名稱	規格
BTN131071	牛血清γ球蛋白標準品(2mg/mL)	1mL
BTN81205	一站式Tricine-SDS-PAGE套裝	30次
BTN100811	質譜兼容型蛋白銀染試劑盒	10次
WE0316	通用型免疫組化試劑盒(鼠兔源一抗)	3ml
SY0317	SDS裂解液	100ml
SY0408	30ml重力層析空柱	1套
QN1067	磷酸化蛋白提取試劑盒	50T|100T

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名稱：谷胱甘肽瓊脂糖(GST-瓊脂糖)
貨號：BTN120101
規格：2mL
谷胱甘肽瓊脂糖親和基質是結合谷胱甘肽(GSH)的4％濃度的交聯珠狀瓊脂糖基質，可用于結合和分離純化帶有谷胱甘肽硫轉移酶(GST)等谷胱甘肽親和性蛋白質分子，特別是重組表達的GST融合蛋白。可用于帶有GST標簽的重組蛋白的純化和GST pull-down實驗。

產品特點：
1．特異性高，不與非GST融合蛋白相結合。
2．高結合量，每毫升基質可結合5～10mg重組GST融合蛋白。
3．高度靈活，可填裝任意品牌的柱子。

儲存條件：低溫運輸，4℃保存(切勿凍結)，有效期一年。

名稱：辛甲基β葡糖苷
貨號：BTN131044
規格：1g
本產品是一種廣泛用于溶解膜蛋白的非離子型去垢劑。低分子量，可通過透析去除。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

名稱：BCA蛋白定量試劑盒
貨號：WE0276
規格：500次微孔板(50管次)
  BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與Cu2+絡合生成絡合物，同時將Cu2+還原成Cu+。BCA試劑可敏感特異地與Cu+結合，形成穩定的有顏色的復合物。在562 nm處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，可根據吸收值的大小來測定蛋白質的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作為蛋白質標準品溶液，測定范圍為20～2000μg/ml。

試劑盒組成：

組成	規格
BCA-A	2×50ml
BCA-B	3ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

保存條件：BSA Standard Solution：2～8℃，其它組分：室溫

注意事項：
1、本產品可以采用分光光度計(試管檢測法)或者酶標儀(微孔檢測法)測定蛋白濃度。
2、建議每次測定蛋白樣品時，繪制標準曲線，以獲得準確數據。
3、BSA標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用1×PBS或0.9%生理鹽水稀釋)。
4、如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表1)，可采用Bradford法蛋白定量試劑盒(WE0275)或其他蛋白定量產品。

使用方法：
1、稀釋BSA標準品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。

管號	稀釋液用量(μl)	BSA標準品用量(μl)	BSA標準品zuì終濃度(μg/μl)
A	0	100	2
B	200	200	1
C	200	200(從B管中取)	0.5
D	200	200(從C管中取)	0.25
E	200	200(從D管中取)	0.125
F	200	200(從E管中取)	0.0625
G	200	0	0(空白)

2、配置BCA工作液：
1)計算BCA工作液總量：
BCA工作液總量=(BSA標準品樣本個數+未知樣本個數)×復孔數×每個樣本BCA工作液體積
舉例：BSA標準品樣本個數為7個，未知樣本個數2個，復孔數3個。
試管檢測法：
BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復孔×2ml/每個樣本工作液體積=54ml
微孔檢測法：
BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復孔×200μl/每個樣本工作液體積=5.4ml
2)根據計算出的BCA工作液需要總量，將BCA-A和BCA-B按照50:1的體積比，配制BCA工作液，充分混勻。
注意：
a. 由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA工作液時，多配制1-2個孔。
b. 新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩定保存24小時。

3、定量檢測
①試管檢測法(蛋白濃度檢測范圍：20-2000μg/ml)
1)按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各100μl分別加到作好標記的試管中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。
2)向每個試管中各加入2ml BCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘 ，將各管冷卻至室溫，須在3-5分鐘內完成檢測。
3)用分光光度計在562 nm處，測定每個樣品及BSA標準品的吸光值，同時做好記錄。
4)繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
② 微孔檢測法(蛋白濃度檢測范圍：20-2000μg/ml)
1)按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各25μl分別加到作好標記的96孔板微孔中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。
2)每孔加入200μl BCA工作液，充分混勻，蓋上96孔板蓋，37℃孵育30分鐘，冷卻至室溫，須在3-5分鐘內完成檢測。
3)用酶標儀在540-590 nm范圍內，測定每個樣品及BSA標準品的吸光值，同時做好記錄。
4)繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
注意：
a. BCA法測定蛋白濃度時，吸光值會隨著時間的延長不斷加深。因此所有樣品測定需在3-5分鐘內完成，否則會影響蛋白定量的準確度。
b. 建議以去除背景值后的吸光值讀數繪制標準曲線。
c. 由于操作誤差導致標準品讀數嚴重偏離線性曲線的應舍去。
d. 未知樣品濃度可以從標準曲線方程中計算得出, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。
e. 如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內，請重新稀釋樣品后再次測定。

4、BCA蛋白定量分析結果舉例：
微孔板檢測法結果

蛋白濃度(μg/μl)	原始吸光值	去除背景值后的吸光值
0	0.086(背景值)	0.000
0.125	0.123	0.037
0.25	0.280	0.194
0.5	0.551	0.465
1	1.068	0.982
2	2.000	1.913

附表1. 干擾物質表

化合物	耐受濃度
緩沖液
乙酸鹽	0.2M
甘氨酸	1M
HEPES	0.1M
MES	50mM
MOPS	50mM
Na+-檸檬酸	＜1mM
PIPES	50mM
磷酸鈉	0.1M
乙酸鈉	0.2M pH 5.5
TES	50mM
Tris	0.1M
鹽類
硫酸銨	干擾
NaCl	1M
尿素	3M
性化合物
DMSO	5%
甘油	10%
去垢劑和變性劑
Brij35	1%
CHAPS	1%
鹽酸胍	4M
NP-40	1%
辛葡糖	1%
SDS	1%
Triton X-100	1%
糖類
葡萄糖	10mM
蔗糖	1M
螯合劑
EDTA	10mM
還原劑
β-巰基乙醇	50μM
DTT	1mM
其他
脂類	干擾
HCl/NaOH	0.1M

儲存條件：2～8℃

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