DNA去磷酸化試劑盒是高品質的克隆與表達產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于克隆與表達產品的研發、生產和供應，為您提供的DNA去磷酸化試劑盒質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括DNA去磷酸化試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：DNA去磷酸化試劑盒
英文名稱：DNA Dephosphorylation Kit
產品貨號：BTN130828
產品規格：20次

分子克隆時，載體的自連大降低了連接效率，而對載體DNA 兩個5′端的-PO4基團進行去磷酸化處理可以抑制自連反應。此外在進行DNA或RNA5′端標記前，也需要將其本來的-PO4基團去除再加上標記基團。本公司開發的DNA去磷酸化產品就是針對這一目的而開發。

產品特點：
1.基于細菌堿性磷酸酶，反應在較高溫度進行，效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基團變成-OH基團，喪失連接能力。
3. 模板可以是單鏈，也可以是雙鏈，既可以是DNA，也可以是RNA。
4.處理后的核酸純化后可以直接用于連接反應和標記反應。
5. 本產品足夠20次去磷酸化實驗。

試劑盒組成

成分	規格
10×去磷酸緩沖液	100μl
細菌堿性磷酸酶(0.5U/μL)	50μl
超純水	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為6個月。

使用方法：
注意：dNTP和ATP 也是堿性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先將其去除。否則它們會耗掉大量的堿性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。

1、在微量離心管中配制下列反應液(50μL)：

成分	用量
DNA片段	不超過10pmol
10×去磷酸緩沖液	5μl
細菌堿性磷酸酶	2.5μl
超純水到	50μl

2、65℃反應30分鐘。如果是RNA樣品，建議在37℃反應30分鐘。
3、酚氯fǎng抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用(見附)。

附：酚/氯fǎng抽提DNA、乙醇沉淀濃縮DNA(本試劑盒不提供相關試劑，需要從本公司另購相關試劑，下列操作僅供參考)：
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超純水增加體積，以免純化過程中DNA 丟失。如果有必須，可以加入和4μL 核酸助沉劑提高回收效率。
2、加入100μL 酚/氯fǎng/異戊醇25：24：1 混合液震蕩半分鐘混勻，室溫12000g離心3分鐘，轉移上清到新離心管中。
3、重復上步操作一次。
4、加0.1倍體積(即10μL)的3 M 乙酸鈉溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍體積(即250μL)的無水乙醇。
6、混勻后12000g 4℃離心10分鐘，小心棄上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暫離心3分鐘后小心棄上清。
8、短暫離心5秒，吸棄殘留液體(約30-50μL)。
9、室溫放置2分鐘干燥后加入適量的超純水溶解DNA，立即使用或放-20℃長期保存。

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