2×即用型PCR預混溶液由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于核酸擴增(PCR)產品的研發、生產和供應，為您提供的2×即用型PCR預混溶液質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括2×即用型PCR預混溶液(熱啟動高保真)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：2×即用型PCR預混溶液(熱啟動高保真)
英文名稱：2×HotStart Pfu Master Mix
產品貨號：SY0039
產品規格：1ml

包含HotStart Pfu DNA Polymerase，dNTP以及優化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進行擴增，大大簡化實驗的操作步驟，提高了高通量操作和實驗結果的重現性。體系中含有的保護劑使得Master Mix 經過反復凍融后仍可維持穩定的活性。PCR產物為平末端。

質量控制
核酸外切酶殘留檢測：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
核酸內切酶殘留檢測：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測: 50 μl體系中，以ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA基因。35個循環后擴增產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。
功能檢測1：以100 ng人基因組DNA為模板擴增α-1-antitrypsin基因。30個循環后取10% PCR產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的8.2 kb條帶。
功能檢測2：以10 ng λDNA為模板擴增30個循環，取10% PCR產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的15 kb條帶。

儲存條件：-20℃。

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名稱：可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑
貨號：BTN60901
規格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是進行PCR的zuì常用工具酶，但是由于它在常溫下還是具有部分活性，所以經常會出現非特異的擴增產物，尤其是當PCR反應體系中有大量非特異DNA存在的時候。目前zuì常見的解決方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗體和使用經過化學修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺點是加熱后抗體會不可逆失活，后者的缺點是需要預熱處理使酶激活。

產品特點：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常溫抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能喪失，當溫度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢復。
2. 耐熱，產品本身為非蛋白質試劑，遠比Anti-Taq抗體穩定，便于保存和運輸。
3. 使用簡單，在加Taq酶前將本產品按PCR反應體積的1/10直接加入即可。
4.適用范圍廣，除Taq DNA聚合酶外，還可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一種酶的抗體一般對另一種酶的活性沒有抑制作用。
5.與后續的RT-PCR兼容。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反應終體積1/10的比例將本產品加入到反應體系中混勻，然后再加入DNA聚合酶，啟動PCR反應。

名稱：可調式易錯PCR試劑盒
貨號：BTN160903
規格：100次
易錯PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法，則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯PCR和常規PCR的比較如下：


產品特點：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的優越性。
2. 配方經過精心優化，實驗人員在一定范圍內可以控制突變率，一輪PCR的突變率范圍在2-8突變/1000bp，更高的突變率可以通過多輪PCR達到。
3.可用于連續易錯PCR，只需把上一次易錯PCR的產物用作下一次易錯PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
4.可以擴增的DNA片段更長，達到3kb，對于3kb以上的產物，建議分段擴增。

試劑盒組成：

成分	規格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯PCR專用dNTP 2.0,10×	300μl
易錯PCR Mix 2.0,10×	300μl
易錯PCR專用MnCl2	300μl
易錯PCR專用dGTP	300μl
超純水	1ml

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為一年。

使用方法：

1. 將模板DNA稀釋到1ng/uL。將引物稀釋到10uM。
 注意：引物是決定易錯PCR成敗的關鍵因素，設計引物時要保證其Tm在70℃，長度在25-30nt之間，GC含量在45%-60%之間，3端GC含量低，并且沒有發夾結構。
2. 根據每1000bp的預期突變數按下表確定易錯PCR的反應條件中MnCl2和dGTP的用量。表中的A表示易錯PCR專用的MnCl2，B表示易錯PCR專用的dGTP：

預期突變數	2個	3個	4個	5個	6個	7個	8個
A的用量(μl)	0	1.0	2.5	4.0	4.0	4.0	4.0
B的用量(μl)	0	0	0	1.0	2.0	3.0	4.0

3.以30μL的標準PCR反應體系為例，如果反應體系不是30μL，各成分需要按等比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分
 注意：可以先計算出超純水的用量，優先加水

成分	用量
超純水	根據第2步加
易錯PCR Mix,10×	3μl
易錯PCR 專用dNTP，10×	3μl
易錯PCR 專用MnCl2	根據上步
易錯PCR 專用dGTP	根據上步
自備DNA模板(1ng/μl)	1μl
自備PCR引物(10μM each)	1μl each
Taq DNA聚合酶(5U/μl)	1μl

4. 按已經優化的PCR條件進行一定循環數的PCR(循環數與突變率的關系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件(對1Kb長的模板而言)：

PCR前變性	94℃ 3分鐘
易錯PCR(循環30次)	94℃ 1分鐘
	45℃ 1分鐘
	72℃ 1分鐘

注：易錯PCR一般不需要熱啟動，也不需要在PCR結束后做延伸處理。長度每增
加1Kb，時間延長1分鐘。易錯PCR循環次數決定每個核苷酸位置的突變幾率，進而決定每個PCR產物可能的突變位點數，所以所需循環數由客戶根據需要改動。
5.電泳檢測是否得到預計長度的PCR產物。
6. 克隆片段進行功能篩選、或者克隆后進行測序分析突變率、或者用此輪PCR的產物為模板，進行下一輪的易錯PCR。

疑難解答：
Q：現象：沒有PCR產物。
A：可能原因：一是引物沒有優化，可以重新設計引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不純，zuì好先膠回收；四是溶解DNA的溶液中有EDTA，降低了PCR反應體系的Mg離子濃度，可以適當補加Mg離子。
Q：現象：太多的PCR條帶或PCR條帶模糊一片。
A：可能原因：一是PCR循環數太多；二是復性溫度太低；三是延伸時間太長；四是引物沒有優化，可以重新設計引物；五是PCR條件沒優化，可以使用touch-down PCR；六是模板有其他DNA污染；七是DNA模板質量不高或者濃度太高。
Q：如果需要更高的突變率，如何辦？
A：可以使用連續多次易錯PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪易錯PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產物作為第二輪易錯PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進行)。


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