植物線粒體提取試劑盒是高品質的亞細胞結構研究產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多植物線粒體提取試劑盒等亞細胞結構研究產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括植物線粒體提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：植物線粒體提取試劑盒
英文名稱：Plant mitochondrial Extraction Kit
產品貨號：HR0251
產品規格：50T|100T

線粒體(mitochondria)是真核細胞中產生能量的重要細胞器。細胞中的能源物質-脂肪、糖、部分氨基酸在此進行zuì終的氧化，并通過偶聯磷酸化生成ATP，供給細胞生理活動之需。
對線粒體結構與功能的研究通常是在離體的線粒體上進行的，本試劑盒用簡便快速的方法即可在40分鐘內提取得到線粒體。

儲存條件：2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事項：
●本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
● zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 移液器、吸頭 ●離心機及離心管
● 渦旋振蕩器 ●冰箱，冰盒
使用注意事項：
1．旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
2．實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

使用方法：
1．取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的1g植物組織樣本剪碎，采用以下一種方法處理：
i、加入3ml提取液后用勻漿機/勻漿器勻漿。
ii、置于研缽中用液氮研磨，研磨后加入 3ml冷的提取液。
iii、加入3ml提取液直接置冰上研磨。
2．將勻漿用 250 目細胞篩或3 層紗布或脫脂棉過濾?；蛘咴?℃，100×g 力條件下離心1分鐘，收集上清，棄沉淀。。
3．將濾液700g離心10分鐘。取上清。
4．將上清 11000g離心20分鐘。
5．棄上清，沉淀中加入 1.5ml線粒體保存液重懸。
6．11000g離心15分鐘。
7．棄上清，沉淀即為線粒體。
8．用線粒體保存液懸浮線粒體，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

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貨號	名稱	規格
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名稱：細胞核微量制備試劑盒
貨號：BTN100601
規格：50次
用高密度介質來分離動物軟體組織(如肝臟、脾臟等)細胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年發明，其原理是細胞核的密度較大，在高速離心條件下(40000g 1小時)可在高密度介質(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下來，從而達到與細胞質其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細胞核，得到廣泛應用。本產品就是在Chauveau方法的基礎上優化改進而來。

產品特點：
1．基于密度梯度分離，可有效去除細胞質及其他細胞器，得到的細胞核純凈。
2．加進氯化鈣、氯化鎂、氯化鉀等改變分離介質滲透壓的物質，減少了細胞核的脆性，增加了細胞核的完整性。
3．精心調節了介質的pH，防止細胞核在分離過程中的聚集，還能保持細胞核的精細結構。
4．快速，整個操作過程僅需1小時即可完成(對一個樣品而言)。
5．提供染色試劑，可以在普通光學顯微鏡下檢測純化的細胞核的純度。
6．處理溫和，得到的細胞核中的大部分蛋白質都具有活性，可以用于膠遲阻實驗、酶活性分析細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究；也可用于片段DNA的純化。
7．不但適用于動物和植物培養細胞，還能用于實體組織(能用Dounce或Potter 勻漿器勻漿的組織均可)。
8．一次微量提取足夠處理0.1 克組織或10E7個培養細胞，本產品足夠50次微量提取。

試劑盒組成：

成分	規格
溶液A成分一	100ml
溶液A成分二(干粉)	約20g
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二(干粉)	約100g
細胞核染色液	1套
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：

一、準備工作：先將溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中，搖晃溶解后得到100mL溶液A。將溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中，搖晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超過2 天，長期放置需要放-20℃。

二、微量細胞核分離(放量提取各試劑的用量可以按比例放大)：
1．對組織細胞：稱取100～200mg 新鮮組織(如動物肝臟、腦、心肌和植物葉片等)，用自備的PBS或生理鹽水洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀或刀片將其剪為碎塊(zuì好大小為1cm3，過小反而不利于勻漿)放入小容量Dounce或Potter 玻璃勻漿器內。
2．對培養細胞：用自備胰酶按標準方法消化培養細胞，PBS 洗滌，800×g 5～10分鐘離心收集細胞，計數。每次微量提取需要5×10E7個細胞，加入1.0mL預冷的溶液A重懸細胞，然后轉移到小容量Dounce或Potter 玻璃勻漿器內
3．用Dounce或Potter 組織勻漿器在冰上破碎組織或細胞。如果用手動勻漿器，一般需要20～30次。如果用電動勻漿器，一般需要處理3-5次，每次5～10秒鐘(轉速為500r/min)。
4．將勻漿液轉移到離心管中。如果勻漿液有可見的結締組織和未破碎的組織塊，可以用三層自備的紗布放在1.5mL離心管管口，將勻漿液過濾進入離心管。可取少量濾液涂在載玻片上制得涂片A，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
5．4℃，700-800×g 水平離心5-10分鐘。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清?？扇∩倭可锨逡和吭谳d玻片上制得涂片B，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
6．加入0.5mL預冷溶液A重懸沉淀。用預冷的勻漿器(用前需要將表面的組織洗去)重懸沉淀?？扇∩倭可锨逡和吭谳d玻片上制得涂片C，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
7．在水平型離心管中加入0.5mL預冷的溶液B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重懸液。
8．在4℃ 23000g離心30分鐘，管底的沉淀即為細胞核。
9．小心吸棄上清液。注意：上清一般比較粘稠，zuì好倒立一段時間。
10．用0.5mL溶液A重懸沉淀。
11．在4℃ 1500g離心5分鐘，吸棄上清，沉淀即為純凈的細胞核。可以直接使用，也可以加等體積的自備甘油，混勻后放液氮或-70℃保存?？扇∩倭可蠎腋∫和吭谳d玻片上制得涂片D，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
12．用本方法一般可以從0.1g 肝臟組織中純化到1-2×107個細胞核。如果后續試驗是Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核后上樣。

三、顯微鏡檢測涂片，計算效率
1．將干燥后的A-D 四張涂片加入固定液固定15分鐘，晾干。
2．Giemsa 染液染10分鐘。
3．自備蒸餾水漂洗數秒，用濾紙吸干水。
4．用顯微鏡(40×)檢查涂片，細胞核將呈紫紅色，混雜的細胞質為淺藍色碎片。根據每步細胞核的數量可以粗略估計回收效率。

疑難解答：
本說明書強烈建議用離心力g 而不是轉速計算所需的離心速度，因為不同的離心機轉子直徑不同，即使是同一轉速，其離心力也不同。如果只知道轉速，可用下式計算離心力。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G為離心力，一般以g(重力加速度)的倍數來表示；[rpm]２即轉速的平方；
R為離心機轉子的半徑(單位為厘米)。

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