0感受態(tài)細胞由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品僅用于生物化學研究方面，我公司的0感受態(tài)細胞品質上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括0感受態(tài)細胞在內，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：0感受態(tài)細胞
英文名稱：E.coli 0 Competent Cells
產(chǎn)品貨號：QN2146
產(chǎn)品規(guī)格：10×100μl|20×100μl

本公司生產(chǎn)的0感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達10⁸，-70℃保存六個月轉化效率不發(fā)生改變。

基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(StrR)endA1 nupG
特點：一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α-互補，可用于藍白斑篩選。該菌株適用于的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定遺傳。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）
1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100μl感受態(tài)細胞為例。
2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置30分鐘。
3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。
4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整，如轉化的DNA總量較多，可取100μl左右的轉化產(chǎn)物涂板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：
1、感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。
2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。
4、轉化率的計算：轉化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。
5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉化，將損失降到zuì低。

儲存條件：-70℃保存，運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月。

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名稱：即用型藍白T載體A型(T7-SP6，有MCS)
貨號：BTN60603
規(guī)格：20次
本產(chǎn)品是用Xcm I酶切環(huán)狀的可保種型藍白T載體(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的線性DNA片段(載體部分)，其兩個末端的5′都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶(如Taq DNA聚合酶)擴增得到的PCR片段。

產(chǎn)品特點：
1. 由于是通過Xcm I酶切制備，所以載體兩端的帶T率為，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉移酶在平末端載體加尾得到的T載體。
2. 克隆的陽性率一般在90%以上，縮短了篩選過程。
3. 插入位點兩側有對稱的常見酶切位點(如EcoR I)，便于對克隆的PCR片段進行近一步的分析。
4. 克隆位點兩側分別有T7和T3 RNA聚合酶啟動子，便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。
6. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區(qū)內，可以進行藍白斑篩選。
7.含有絲狀噬菌體f1 復制起始子，可以制備單鏈DNA。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
即用型藍白T載體(40ng/uL)	20μl
陽性對照(40ng/uL)	5μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

使用方法：

一. PCR產(chǎn)物的純化和定量
1. 將PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳分離。zuì好不要使用TBE緩沖液，因為它會影響DNA的膠回收效率。
2.在長波(360nm)紫外燈下快速切膠，盡可能切掉多余的凝膠。為避免嘧啶二聚體的形成，可以使用百奧萊博的DNA防護劑UV Scavenger(BTN60601)。
3. 用百奧萊博的柱式DNArc(BTN60202)純化回收PCR片段。溶解PCR片段的超純水體積越小越便于后續(xù)操作。
4. 將回收的片段與濃度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或綠如藍染料(BTN70303)的瓊脂糖凝膠中電泳，通過比較DNA條帶的熒光強度而估測PCR純化產(chǎn)物的濃度。注意：一般不推薦使用測OD260的方法，因為回收的DNA很珍貴，該方法需要比較多的DNA。
5. 如果所得的DNA片段濃度較低，可以使用本公司核酸濃縮劑(BTN110801)將其濃縮到需要的濃度。
6. 如果PCR片段為平末端，則需要用加A試劑盒處理，否則不能用于與T載體的連接反應。

二. 連接反應
1. 短暫離心裝有T載體的離心管。
2.在兩個離心管中加入下列成分：

成分	樣品管	負對照	正對照
自備T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl	1μl
藍白T載體(40 ng/uL)	1μl	1μl	1μl
自備PCR純化產(chǎn)物	見下注	不加	不加
陽性對照(40ng/uL)	不加	不加	1μl
自備T4 Ligase(5-10U/μL)	1μl	1μl	1μl
補超純水到	10μl	10μl	10μl

注：PCR純化產(chǎn)物與藍白T載體的摩爾比zuì好為3-10，可以按下面的公式計算出連接反應中需要的PCR純化產(chǎn)物的ng數(shù):

假如插入片段和載體的連接比例設定為3，連接反應中加入藍白T載體(長度為3Kb)的量為40ng，則需要長度為0.5Kb的PCR純化產(chǎn)物的量是:

3. 用移液器吹打連接反應使之混勻后，16℃孵育12小時(或按T4 Ligase供貨商提供的說明書進行連接)。

三. 細菌轉化
1. 將100μL感受態(tài)細胞于冰上解凍。注意：zuì好使用轉化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受態(tài)細胞進行轉化，因為采用單堿基突出端進行連接不是很有效。
2. 取5μL連接產(chǎn)物加入到感受態(tài)細胞中，輕輕旋轉幾次以混勻內容物。在冰上放置30分鐘。
3. 將管放入預加溫到42℃的水浴中，熱休克90秒。快速將管轉移到冰浴中。

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