PCR Master Mix 由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，PCR Master Mix 是我司眾多優(yōu)質(zhì)核酸擴(kuò)增(PCR)之一，質(zhì)量堪比同類(lèi)進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷(xiāo)中，恭候您的咨詢訂購(gòu)。...

特別提示：包括PCR Master Mix (含染料)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：PCR Master Mix (含染料)
英文名稱(chēng)：PCR Master Mix (With Dye)
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0025
產(chǎn)品規(guī)格：1ml

PCR Master Mix是即用型的常規(guī)PCR預(yù)混合溶液，含有Taq DNA Polymerase，dNTP混合物，MgCl2以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，大大簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)的操作步驟，提高了高通量操作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。

Mix中加入電泳緩沖液和染料，使得PCR產(chǎn)物可以直接進(jìn)行電泳，染料的存在不會(huì)干擾擴(kuò)增效率。體系中含有的保護(hù)劑使得Master Mix 4oC條件下長(zhǎng)期放置，或經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融后仍可維持酶的活性以及產(chǎn)品的穩(wěn)定性。PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端，可輕松克隆至T載體。

活性定義：用活性化的大馬哈魚(yú)精子作為模板/引物，在74oC，30min內(nèi)攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位（U）。

質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時(shí)，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸外內(nèi)酶殘留檢測(cè)：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時(shí), DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測(cè): 50 μl體系中，以ddH2O為模板，擴(kuò)增E.coil 16s rDNA基因。35個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無(wú)擴(kuò)增條帶。
功能檢測(cè)：50 μl體系中，以100 ng人基因組DNA為模板擴(kuò)增α-1-antitrypsin基因。30個(gè)循環(huán)后取10% PCR產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的360 bp條帶。
穩(wěn)定性檢測(cè)： PCR Master Mix 分別在-20 oC放置1年、4 oC放置3個(gè)月、25 oC放置1個(gè)月后，菌落PCR擴(kuò)增1.2 kb片段。電泳結(jié)果顯示2×PCR Master Mix具有非常好的穩(wěn)定性。

操作注意事項(xiàng)
由于Taq DNA Polymerase室溫下也有一定的反應(yīng)活性，PCR反應(yīng)體系配制需在冰上進(jìn)行。體系混勻后快速置于PCR儀進(jìn)行反應(yīng)。這樣可以減少反應(yīng)準(zhǔn)備階段的非特異擴(kuò)增，有助于得到更好的PCR結(jié)果。

引物設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)
1.引物3’端zuì后一個(gè)堿基選擇C或G；
2.引物3’端zuì后8個(gè)堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯(cuò)配；
3.引物3’端盡量避免發(fā)卡結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)；
4.引物Tm值控制在55℃-65℃之間；
5.引物額外附加序列，即與模板非配對(duì)序列，不應(yīng)參與引物Tm值計(jì)算；
6.引物GC含量控制在40%-60%之間；
7.正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。

根據(jù)您的關(guān)注的PCR Master Mix (含染料)，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：


BTN131212 PCR Mix染料 10mL
BTN130985 免DNA提取PCR試劑盒(細(xì)胞組織裂解物直接PCR試劑盒) 100次
YT385 dATP溶液(100mM) 250μl
WE0143 快速實(shí)時(shí)熒光定量PCR預(yù)混體系(高含量ROX校正染料) 5ml
SY0029 2×PCR Plus Master Mix(不含染料) 5×1ml
JN0024 熱啟動(dòng)Taq Plus DNA聚合酶 250U
JN0041 2×Ultra Taq PCR MasterMix 0.5ml×5

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名稱(chēng)：dNTP溶液(10mM)
貨號(hào)：BTN51208B
規(guī)格：0.5mL
本產(chǎn)品是dATP、dTTP、dGTP、dCTP四種核苷酸的混合液，每種核苷酸的濃度為10mM，純度在98%以上(HPLC檢測(cè))，不含DNA內(nèi)切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA測(cè)序、DNA探針標(biāo)記等反應(yīng)。使用濃度根據(jù)具體的反應(yīng)決定，請(qǐng)參考相關(guān)手冊(cè)。



儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸和-20℃保存、有效期一年。

DNA為何使用2"-脫氧核糖和胸腺嘧啶？
 DNA為何不選擇現(xiàn)成的光合作用產(chǎn)物核糖和合成RNA的原料尿嘧啶(uracil)分別作為其糖分子和堿基，而去選擇需要額外的合成步驟才能得到的2"-脫氧核糖和胸腺嘧啶(thymine)，其原因何在呢？目前的主流觀點(diǎn)是：DNA不能選擇核糖的原因之一是由于核糖2"位置上的OH基團(tuán)會(huì)使得到的雙螺旋骨架結(jié)構(gòu)不均勻、不平行，難以有效地折疊進(jìn)染色體結(jié)構(gòu)中，而使用2"-脫氧核糖則能得到均勻平行的雙螺旋結(jié)構(gòu)；原因之二是核糖2"位置上的OH基團(tuán)會(huì)對(duì)鄰近的磷酸二酯鍵進(jìn)行分子內(nèi)親核攻擊，降低分子的穩(wěn)定性，而對(duì)遺傳物質(zhì)來(lái)說(shuō)穩(wěn)定性十分重要，所以DNA選擇了失去分子內(nèi)親核攻擊能力的2"-脫氧核糖。對(duì)信使分子而言，穩(wěn)定性并不重要，所以RNA仍然使用核糖。
 DNA使用胸腺嘧啶的原因是DNA中的胞嘧啶(cytosine)會(huì)緩慢水解變成尿嘧啶，如果尿嘧啶也是DNA的正常組成成份，則DNA修復(fù)系統(tǒng)就不能區(qū)分哪些尿嘧啶是正常的，哪些是需要修復(fù)的。使用胸腺嘧啶(比尿嘧啶分子多一個(gè)甲基)不但能保持跟尿嘧啶一樣的形成堿基對(duì)的能力，同時(shí)又能跟尿嘧啶區(qū)別開(kāi)來(lái)，使DNA分子中出現(xiàn)的任何尿嘧啶都能被尿嘧啶DNA糖苷酶(uracil-DNA glycosylase)發(fā)現(xiàn)和修復(fù)。

名稱(chēng)：PCR級(jí)綠如藍(lán)DNA染料
貨號(hào)：BTN70909
規(guī)格：0.1mL
第二代的非飽和型熒光染料(如SYBR Green I)在高濃度下會(huì)抑制熒光PCR，所以反應(yīng)重復(fù)性很不穩(wěn)定，并且不能用于要求嚴(yán)格的Tm分析。本產(chǎn)品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣，是第三代飽和型熒光染料，在飽和濃度下也不抑制熒光PCR反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 飽和濃度不抑制PCR反應(yīng)，因此得到的熒光信號(hào)更強(qiáng)。
2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強(qiáng)于目前zuì常用的SYBR Green I。
3. 飽和濃度下染料分子沒(méi)有機(jī)會(huì)在DNA分子間發(fā)生移位，因此熒光強(qiáng)度跟DNA變性程度呈線性關(guān)系，可以用于精細(xì)的Tm 測(cè)定實(shí)驗(yàn)，如High-resolution melting curve analysis等。
4.跟目前常用的PCR 儀器(包括iCycler、LightCycler、ABI 測(cè)序儀)兼容。激發(fā)和發(fā)射光譜跟FAM和SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I的光學(xué)設(shè)置參數(shù)。
5. 不能滲透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，毒性和致突變性遠(yuǎn)低于SYBR Green I。
6.可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲線分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛細(xì)管電泳等研究。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸、-20℃避光保存，有效期一年。

使用方法：
先將本產(chǎn)品放置在室溫融化，然后震蕩10秒鐘，短暫離心后待用。下面以50μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例說(shuō)明其使用：

1.在一干凈的PCR 管中，加入下列成分：

試劑	加入量
10×PCR Buffer(No Mg2+)	5μl
MgCl2 50mM	2.5μl
dNTP 10mM	1μl
本產(chǎn)品(PCR級(jí)綠如藍(lán)染料)	2.5μl
Taq DNA聚合酶	1-5U
DNA模板	適量
PCR引物	5-50 pmol each
補(bǔ)水到	50μl

2. 放入熒光PCR 儀中進(jìn)行qPCR，并在退火或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)記錄熒光信號(hào)。使用的光學(xué)參數(shù)可以跟FAM或SYBR Green I 完全一樣。

注意事項(xiàng)：
1. 如果使用iCycler，可以不加FAM；如果使用ABI系統(tǒng)，需要在Well Inspector選項(xiàng)下的非特異參照中選擇“無(wú)”；使用LightCycler時(shí)，zuì好在PCR 體系中再加入終濃度為0.5mg/mL的BSA以降低儀器對(duì)染料和模板的非特異吸附。
2. 如果使用化學(xué)修飾過(guò)的Taq DNA聚合酶，可能需要減低KCl的濃度并提高Tris的濃度。

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