北京百奧萊博供應的XL1-Blue電擊感受態細胞用于科學研究，我公司的XL1-Blue電擊感受態細胞品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括XL1-Blue電擊感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：XL1-Blue電擊感受態細胞
英文名稱：XL1-Blue Electroporation-Competent Cell
產品貨號：MQ0031
產品規格：5×50μl/20×50μl

XL1-Blue電擊感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。XL1-Blue菌株能保證高拷貝質粒穩定復制，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。hsdR17突變導致EcoK核酸內切酶系統缺失，增強了外源DNA的穩定性和提取質量。lacIqZΔM15的存在使XL1-Blue菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環素抗性。
XL1-Blue電擊感受態細胞適用于各種文庫構建，經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1×1010 cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44(rk-,mk+)，relA1 lac [F" proAB lacIqZ?M15：Tn10(tetr)]
操作說明：
1.0.1cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的XL1-Blue電擊感受態細胞插入冰中5分鐘，待其融化，加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。
A.測定轉化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質粒pUC19；
B.對于連接產物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量T緩沖液(10mM Tris HCl，pH7.5;1mM EDTA)重懸，DNA濃度不超過100ng/μl，體積不超過5μl/50μl感受態。
3.用200 μl槍頭將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。
4.啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此為BioRad電轉儀推薦參數，也可按所用電轉儀推薦的參數操作)，將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。
5.2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700 μl不含抗生素的無菌S.O.C.培養基(室溫)，用1ml槍吹吸電擊杯底部數次混勻后，轉移到50ml離心管(BD Falcon50ml錐形離心管等)，向離心管中補加S.O.C.培養基至5ml。37℃，225 rpm復蘇60分鐘。
6.5000rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應抗生素的S.O.C平板上(因菌量較大，若全部涂板請選用直徑15cm培養皿2-5個)。將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養13-17小時。
注意事項：
1.加入DNA時體積不應大于感受態體積的1/10。
2.電擊感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。
3.當DNA不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。
4.電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和DNA的溶液中產生電流和弧光放電的風險。
5.若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
6.對于連接產物轉化，zuì好轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重懸產物，保證 DNA濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。
7.混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態細胞時不可用孔徑過小的槍頭(普通 200μl槍頭應剪去槍頭尖 0.6cm)避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少zuì終用于涂板的菌量。
8.電擊感受態細胞zuì好保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。

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貨號	名稱	規格
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名稱：可保種型藍白T載體
貨號：BTN60803
規格：50 ng
本產品是環狀的可以制備Clion藍白T載體的質粒DNA。T載體是克隆PCR擴增產物的必不可少的工具，但是由于市場上的各種T載體質量參差不齊，用戶很難購買到滿意的產品；同時購買的T載體為線性DNA，不能保種，必須反復購買，累計成本很高。為解決這一問題，我司特推出可保種型T載體，用戶只需要購買Xcm I內切酶就可以自己制備高質量的T載體，隨用隨配，十分方便。

產品特點：
1.一次購買，終身擁有。本產品提供制備T載體用的環形質粒DNA，可以象其他質粒一樣保種并長期保存。
2. 隨用隨配，十分方便。用戶只需要提供Xcm I 限制性內切酶和基本分子生物學實驗條件，就可以自己制備T載體。整個過程只需要兩天。
3. T載體含T 率為。本方法不是使用傳統的加尾法，而是使用Xcm I酶切法。質粒的多克隆位點上預先插入了一段長為1.3 Kb的Xcm I DNA片段,經Xcm I酶切后回收得到的質粒DNA(T載體)兩端自然全部帶有T 突出，比例遠遠高于用Taq DNA聚合酶加尾法和TdT 加尾法得到的T載體。
4. 方便各種下游操作。用本產品得到的藍白T載體插入位點兩側有多種常見的酶切位點，便于后續克隆； Xcm I 位點在Alpha 互補區，可以使用藍白斑篩選重組子；兩邊還有T7和SP6 RNA聚合酶啟動子，便于制備RNA探針。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

使用方法：

一.細菌的轉化
1. 將100μl感受態細胞于冰上解凍。注意：zuì好使用end A1菌種(如DH1、DH5、DH5α、JM109、XL1-Blue等。常用宿主細菌的基因型可以參考《分子克隆手冊》等參考書)。因為這類細菌所含DNase少，制備T載體后，殘留的DNase對的T末端的破壞機會更小。
2. 取5-10μl本產品加入到感受態細胞中，輕輕旋轉幾次以混勻內容物。在冰上放置30分鐘。
3. 將管放入預加溫到42℃的水浴中，熱休克90秒。快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻1～2分鐘。
4. 每管中加900μl LB培養基，37℃振蕩培養1小時。
5. 取100μl培養液涂布到含Amp的LB瓊脂平板表面。
6. 將平板置于室溫直至液體被吸收。
7. 倒置平皿，于37℃培養，12～16小時后可出現菌落。

二.細菌的鑒定
1. 挑取單個菌落進行過夜細菌培養。
2. 按常規的方法進行質粒小量制備。
3. 用Xcm I內切酶按下面條件酶切提取的質粒DNA，如果大規模酶切，需要按比例增加各成分用量:

成分	使用量
Xcm I Buffer,10×	5μl
質粒DNA	<或= 2μg
Xcm I	1μl
超純水	加到50μl

 37℃保溫一小時，65℃保溫20分鐘使酶失活。
4.電泳，本產品被Xcm I酶切后將產生3 Kb和1.3 Kb的兩段DNA。
5. 如果Xcm I酶切圖譜正確，則按常規的方法進行細菌的保種。

三. T載體的制備
1. 參考《分子克隆手冊》等參考書培養細菌和提取質粒DNA。注意：一定要去盡可能去除殘留的RNA和蛋白質(含殘留DNase)的污染。
2. 用Xcm I酶切質粒。注意：酶切時間zuì好不要超過一小時，避免殘留的DNase對T末端的破壞。
3.電泳后切下含3Kb DNA(既藍白T載體)的膠段。注意：千萬不要用UV照射將要回收的片段，因為UV會使DNA交連，使DNA失去轉化細菌的能力。如果酶切的DNA量大，可以使用百奧萊博綠如藍核酸染料,可以直接在可見光和黑背景下切膠。如果別無選擇，zuì好在長波(360nm)紫外燈下快速切膠，盡可能切掉多余的凝膠。為避免DNA交連，可以使用百奧萊博的DNA防護劑UV Scavenger(BTN60601)
4. 用常規DNA回收方法進行膠回收。
5. 測定T載體DNA的濃度后，將T載體DNA保存在-20℃備用或直接使用。

四.連接反應
1. 短暫離心裝有T載體的離心管。
2.在兩個離心管中加入下列成分：

成分	樣品管	陰性對照管
T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl
藍白T載體	20-50ng	20-50ng
PCR 純化產物	50-500ng	不加
T4 Ligase	3-5U	3-5U
補水到	10μl	10μl

注意: PCR純化產物與藍白T載體的摩爾比zuì好為3:1-10:1。
3. 用移液器吹打連接反應使之混勻后，16℃孵育12小時(或按T4 Ligase供貨商提供的操作說明書進行連接)。

五.細菌轉化和鑒定
1. 取5μl連接產物進行轉化，具體步驟見本手冊一，zuì好使用含X-gal、IPTG、Amp的LB瓊脂平板以便進行藍白篩選。
2. 按經典的質粒提取+酶切或測序鑒定，可以選用的、在插入位點兩側都有酶切位點的酶有BstZ I、EcoR I和Not I。可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。按菌落PCR方法篩選，可選用百奧萊博的菌落PCR試劑盒(BTN50901)進行快速篩選，需要T7和SP6 RNA聚合酶啟動子引物。

MCS位點：


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