感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的克隆與表達(dá)產(chǎn)品，本制品用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒等克隆與表達(dá)產(chǎn)品的客戶，歡迎您的隨時垂詢。...

特別提示：包括感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
英文名稱：Super Competent Cell Preparation Kit
產(chǎn)品貨號：YT023
產(chǎn)品規(guī)格：100次

本試劑盒是一種用于快速制備高轉(zhuǎn)化效率大腸桿菌感受態(tài)細(xì)菌的試劑盒。超級感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒是在傳統(tǒng)超級感受態(tài)細(xì)菌制備方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)改良而成，操作便捷，轉(zhuǎn)化效率高。使用本試劑盒可以使感受態(tài)效率達(dá)到108-109cfu/μg質(zhì)粒。對于小的質(zhì)粒效率略高，而對于大的質(zhì)粒則效率略低一些。用本試劑盒制備的超級感受態(tài)細(xì)菌不僅可以轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，而且非常適合于轉(zhuǎn)化普通的連接產(chǎn)物，特別適合于轉(zhuǎn)化平端連接等需要高轉(zhuǎn)化效率的情況。使用本試劑盒操作簡單，細(xì)菌培養(yǎng)好后僅需60分鐘左右即可完成超級感受態(tài)細(xì)菌的制備。

本試劑盒適用于大部分常見的大腸桿菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。對于一些用于蛋白表達(dá)或病毒質(zhì)粒構(gòu)建的特殊大腸桿菌也適用，制備出來的感受態(tài)菌轉(zhuǎn)化質(zhì)粒肯定沒有問題，但如果轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物有時效果不如DH5α等其它常見的細(xì)菌。本試劑盒提供了專門用于制備超級感受態(tài)的特殊細(xì)菌培養(yǎng)液，可以提高制備出來的感受態(tài)菌的轉(zhuǎn)化效率，同時也方便了用戶，不必自行配制相應(yīng)的培養(yǎng)液。本試劑盒可以分多次使用，共可以制備足夠進(jìn)行100次轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)菌。

產(chǎn)品組份：

感受態(tài)細(xì)菌培養(yǎng)液	125ml
感受態(tài)制備試劑A	50ml
感受態(tài)制備試劑B	5ml

注意事項：
1. 在制備感受態(tài)細(xì)菌的過程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受態(tài)菌的過程中熱休克后的37℃培養(yǎng)時也必須使用無抗生素的LB，即便轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒是有抗性的。
2. 超級感受態(tài)細(xì)菌培養(yǎng)液含有較高濃度的蛋白等物質(zhì)，在反復(fù)凍融后會產(chǎn)生少量沉淀，屬正常現(xiàn)象，不會影響試劑盒的使用效果。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

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名稱：單細(xì)胞懸浮液
貨號：BTN130805
規(guī)格：1mL
本產(chǎn)品是單細(xì)胞懸浮溶液，本產(chǎn)品與后續(xù)各種單細(xì)胞分析實(shí)驗、單細(xì)胞擴(kuò)增實(shí)驗兼容。

儲存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

名稱：釀酒酵母Y187感受態(tài)細(xì)胞
貨號：BTN140389
規(guī)格：10×100μL
 Y187菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母單雜，雙雜實(shí)驗用菌株，MATα型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通過mating 操作進(jìn)行篩庫試驗。Transformation marker 為: trp1，leu2，報告基因為：lacZ，MEL1。Y187-GAL4 酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。質(zhì)粒PGBKT7的篩選標(biāo)志為TRP1，用于表達(dá)DNA-BD(來自酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4N 端1～ 174 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒PGADT7的篩選標(biāo)志為LEU，用于表達(dá)AD(GAL4 C 端768～881 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系統(tǒng)原理：一個完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4可分為功能上相互的兩個結(jié)構(gòu)域：位于N 端1～174 位氨基酸區(qū)段的DNA 結(jié)合域(DNA-BD)和位于C端768～881 位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結(jié)合。而AD可以啟動UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。BD和AD 單獨(dú)存在不能激活轉(zhuǎn)錄，但當(dāng)二者接近時，則呈現(xiàn)完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動子下游基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。正常條件下，BD 不與AD結(jié)合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey發(fā)生相互作用，就會促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉(zhuǎn)錄。Y187 有兩個報告基因：lacZ，MEL1，分別由兩種不同的啟動子(G1，M1)啟動，這兩種啟動子只有GAL4 識別的17bp 核心區(qū)相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率。

 Y187感受態(tài)細(xì)胞是實(shí)驗室常用酵母雙雜用菌株，本產(chǎn)品經(jīng)特殊工藝制作而成，經(jīng)PGADT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率為104 cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–,gal80Δ，URA3: :GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
Y187感受態(tài)細(xì)胞	0.1ml×10支
PGADT7(control vector)，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
說明書	1份

儲存條件：感受態(tài)細(xì)胞干冰運(yùn)輸、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/liAC、PGADT7質(zhì)粒4℃保存；有效期半年。

自備試劑：目的DNA、YPDA、SD培養(yǎng)基等。

使用方法：
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。
以下實(shí)驗以100μL感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5μg，CarrierDNA(95-100℃ 5分鐘，快速冰浴，重復(fù)一次)10μL，PEG/LiAc 500μL，吹打混勻，30℃水浴30分鐘(15分鐘時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
3. 42℃水浴15分鐘(7.5分鐘時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
4. 5000rpm離心 40秒，棄上清。取400μL ddH2O 重懸沉淀，5000rpm離心 30秒，棄上清。
5. 取 50μL ddH2O 重懸沉淀，涂板，29℃培養(yǎng)48-96小時。

注意事項：
1. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA 平板29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm 克隆；涂SD 單缺平板29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm 克隆，涂SD 雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm 克隆。
2.菌落變粉不是污染，是酵母細(xì)胞生長中一個常見現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破壞，Adenine 合成途徑受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole(AIR)在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
4. 同時轉(zhuǎn)化 2-3 種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。

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