北京百奧萊博供應(yīng)的農(nóng)桿菌EHA105化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞用于科研試驗(yàn)，農(nóng)桿菌EHA105化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是我司眾多優(yōu)質(zhì)克隆與表達(dá)之一，質(zhì)量堪比同類(lèi)進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷(xiāo)中，恭候您的咨詢(xún)訂購(gòu)。...

特別提示：包括農(nóng)桿菌EHA105化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：農(nóng)桿菌EHA105化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱(chēng)：E.coli EHA105 Chemical Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN140383
產(chǎn)品規(guī)格：10×100μL

 本產(chǎn)品為EHA105農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽-利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pEHA105(pTiBo542DTDNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。本產(chǎn)品適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)103cfu/μg。

儲(chǔ)存條件：干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期一年。

自備試劑：質(zhì)粒DNA、液氮等

使用方法：

轉(zhuǎn)化前準(zhǔn)備
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 將抗性平板在28℃培養(yǎng)箱中平衡至少15分鐘。
轉(zhuǎn)化方法
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞于冰水浴中融化。
2. 無(wú)菌條件下，向剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細(xì)胞懸液中加入需要轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒，每100μL感受態(tài)細(xì)胞加1ug(體積不大于10μl)質(zhì)粒DNA，輕柔混勻。冰水浴中靜置5分鐘。
3. 將離心管置于液氮中速凍5分鐘(注：也可以用干冰和無(wú)水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速將離心管置于37℃水浴靜置中5分鐘，不要晃動(dòng)水面。然后快速轉(zhuǎn)至冰水浴中靜置5分鐘。
5. 加入800μl 無(wú)抗生素的2×YT或LB液體培養(yǎng)基，28-30℃振蕩培養(yǎng)2～3小時(shí)。使菌體復(fù)蘇，表達(dá)抗性。
6. 5000rpm離心1分鐘收菌，保留100μl左右上清，輕輕吹打重懸菌體，均勻涂布到含有相應(yīng)抗生素的LB 固體培養(yǎng)基平板上，待平板中的液體完全吸收后，倒置平板，28-30℃培養(yǎng)48-72小時(shí)。
 注：當(dāng)平板只含有50μg/mL kan時(shí)，28℃培養(yǎng)48 h 即可；平板中同時(shí)加入50μg/mL kan、20μg/mL rif時(shí)，需28℃培養(yǎng)60 h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h。

注意事項(xiàng)：
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 利福平濃度不應(yīng)高于25μg/mL，過(guò)高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5.培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素，Ti質(zhì)粒丟失的概率低(可以忽略)。

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名稱(chēng)：?jiǎn)渭?xì)胞裂解液(DNA提取)
貨號(hào)：BTN130803
規(guī)格：1mL
本產(chǎn)品為單細(xì)胞DNA提取專(zhuān)用裂解液，本裂解液經(jīng)多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過(guò)程中對(duì)核酸的破壞，維持核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。純化所得DNA可用于全基因組擴(kuò)增(WGA)等實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品足夠使用200次以上。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期兩年。

名稱(chēng)：?jiǎn)渭?xì)胞懸浮液
貨號(hào)：BTN130805
規(guī)格：1mL
本產(chǎn)品是單細(xì)胞懸浮溶液，本產(chǎn)品與后續(xù)各種單細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)、單細(xì)胞擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)兼容。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

名稱(chēng)：大腸桿菌BL21 Star(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào)：BTN150801
規(guī)格：10*100μL
 BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞來(lái)源于BL21(DE3)菌株，由特殊工藝制作，使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)本產(chǎn)品，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10cfu/μg。
 BL21 Star(DE3)菌株的特點(diǎn)是含有rne131基因突變體。rne131突變基因能夠增強(qiáng)菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性，從而有效提高蛋白表達(dá)能力。本產(chǎn)品主要適用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET 系列)的高水平蛋白表達(dá)。
 菌株基因型為：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)。

儲(chǔ)存條件：干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、LB培養(yǎng)基等。

使用方法：
1.從-80℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞，置于冰上解凍。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以100μL感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 取 100μL冰上融化的BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
3. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
4. 向離心管中加入700μL不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(LB)，混勻后37℃，200rpm 復(fù)蘇60分鐘。
5. 取100μL左右菌液涂布于含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。如果轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒，可以減少涂布的量。
6. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

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