R01與O2的這種反應是非破壞性且完全可逆的,R01無細胞毒性,是化學穩定的,惰性的,水溶性的和細胞不滲透的,不能透過完整的細胞膜。因此還可同時與糖酵解,線粒體膜電位JC-1,ROS和細胞ATP、LDH等檢測的試劑結合使用,進行多參數檢測。用R01進行細胞外耗氧檢測方法及其簡單,不需要適用特殊的儀器設備,只需要熒光酶標儀之類的熒光讀...

產品特點：

● 廣泛適用于各種體外模型；不再局限于單層細胞,還能測定懸浮細胞、微生物和特定的3D培養物；

● 簡單的“混合-檢測”方案允許使用多種其他分析試劑盒進行多參數分析；

● 可逆轉,能夠觀察耗氧量的瞬態和長時間變化；

● 可適配多種熒光酶標儀以及標準96孔和384孔；

● 以高通量的形式方便地測量；

● 無需等待專用設備空閑所需的實驗室時間,也無需大額資金專用設備投入。

產品用途：

● 線粒體功能和細胞代謝研究；

● 測量活細胞中的線粒體活性；

● 研究各種處理對細胞耗氧量的影響；

● 研究基因修飾對細胞耗氧量的影響；

● 研究呼吸和線粒體功能；

● 探究氧含量與細胞代謝變化之間的聯系；

● 直接評估藥物處理的線粒體毒性。

適用樣本類型：

● 細胞：貼壁細胞/懸浮細胞/透化細胞；

● 分離的線粒體；

● 3D培養物；組織；

● 分離的酶；

● 微生物：細菌/酵母/霉菌。

熒光檢測模式：

● 基礎模式：熒光強度測定；

● 標準模式：時間分辨熒光測量（TR-F）；

● 高級模式：熒光Lifetime calculation（FLIM,Autofluorescence Lifetime Imaging system,Dual-read Ratiometric TR-F measurement）

【注】：

● 以上取決于酶標儀的類型和儀器設置,不是所有儀器可用。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光酶標儀（須配備相應的波長過濾器和溫度控制器。時間分辨熒光功能的讀板機佳（如果有）） ● 離心機 ● PBS/HBSS（無酚紅） ● 對照試劑（選配,非必須）：Glucose Oxidase,Antimycin A,FCCP ● 黑色透明底熒光專用培養板

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 以下操作以96孔細胞培養板為例。其他培養容器或裝置請根據實際情況調整試劑用量和檢測方法。各試劑等比例調整即可。O₂熒光探針終濃度25倍稀釋最佳。
● R01探針的信號變化直接取決于所測量細胞類型的細胞呼吸速率,建議盡可能使用每孔高的細胞密度作為起點,并根據需要減少細胞數量。

● 并非所有細胞類型都消耗足夠用于檢測的氧氣。

● 必須用熒光培養專用的透明底黑色培養板,減少檢測時各孔之間的光互相干擾。

● 用于測定的所有儀器試劑溶液耗材均需37℃預熱。

● 添加氧氣封閉液時注意避免產生氣泡。

● 盡可能使用多通道移液器添加試劑。

● 如果藥物有紅色熒光（如阿霉素等）需要換液,不含培養基和待測藥物,用HBSS貨PBS體系檢測,在無血清無酚紅環境檢測。

● 建議設定FCCP處理的陽性對照樣本。

關于儀器設置：

● 溫度對檢測有較大影響。有條件的話,務必使用配有溫度控制的酶標儀。

● 常規的熒光信號強度測量,使用基于單色儀或基于過濾器的酶標儀,最佳激發波長使用450-460nm,發射波長使用586-600nm。可根據實際機器和樣本選擇信號最強的波長。

● 具有檢測增益參數（PMT,Parameters）的通常設置為中或高。

● 使用bottom read讀數和top read讀數均可,基于不同的細胞模型,建議在預實驗時兩種讀數模式均嘗試下,看哪種的趨勢更加明顯。

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