本產(chǎn)品中的CellROX Green本身熒光較弱，可自由透過(guò)活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化，氧化產(chǎn)物可摻入染色體DNA中，熒光強(qiáng)度增大，產(chǎn)生明亮的綠色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞ROS含量的多少和變化。...

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè)；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測(cè)方法：

● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦 ● 熒光酶標(biāo)儀 ● 熒光光度計(jì)

樣本類(lèi)型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

使用方法：

CellROX Green探針配制：

根據(jù)需要用量，用新鮮無(wú)酚紅無(wú)血清培養(yǎng)基或HBSS稀釋CellROX Green探針后充分混勻，避光保存?zhèn)溆谩?/span>

2、探針使用終濃度200-1000倍稀釋。一般預(yù)實(shí)驗(yàn)起始濃度按500倍即可。

【注】：

● 不能用含有血清的培養(yǎng)基稀釋探針。

● 也可以用HBSS緩沖液或PBS稀釋探針。

● 如果熒光太強(qiáng)，超過(guò)儀器的檢測(cè)范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。

CellROX Green探針標(biāo)記：

1、CellROX Green溶液可在新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基、HBSS緩沖液或組織灌流液中稀釋到所需濃度，終濃度200-1000倍稀釋?zhuān)源巳旧焊鼡Q細(xì)胞培養(yǎng)基或灌流液；也可直接向無(wú)血清細(xì)胞孵育液體或灌流液中加入CellROX Green探針溶液至所需濃度。

【注】：

● 檢測(cè)貼壁細(xì)胞時(shí)，熒光顯微鏡檢測(cè)可以原位染色也可以消化下來(lái)后染色，流式檢測(cè)消化下來(lái)后染色。

2、依據(jù)細(xì)胞ROS含量的不同，CellROX Green終濃度可選擇在200-1000倍稀釋的范圍，孵育時(shí)間可選擇30分鐘-4小時(shí)，在37℃或室溫進(jìn)行避光孵育。

【注】：

● 如果熒光太強(qiáng)，超過(guò)儀器的檢測(cè)范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。

3、孵育結(jié)束后，用PBS等新鮮緩沖液清洗細(xì)胞或組織。漂洗時(shí)間要短。

【注】：

● 也可以用HBSS/PBS洗滌細(xì)胞。

熒光顯微鏡觀察：

1、對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，取25-50μL細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。

2、熒光顯微鏡下觀察。

流式細(xì)胞儀分析：

1、染色并洗滌細(xì)胞后用0.5～1 mL冷PBS重懸細(xì)胞（5～10萬(wàn)）。

2、采用488nm波長(zhǎng)激發(fā)，發(fā)射波長(zhǎng)520 nm，測(cè)定待測(cè)細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度。

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