活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，參與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。組織活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針DCFHDA進行組織活性氧檢測的試劑盒。本試劑盒中的DCFHDA ROS探針為綠色熒光的活性氧探針，具有488/520nm的最大激...

產品特點：

● 使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標儀檢測；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：

● 熒光分光光度計 ● 熒光酶標儀

樣本類型：

● 新鮮組織 ● 凍存組織

使用方法：

試劑準備：

根據樣本數量，用純水將DCFHDA探針10倍稀釋。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現配現用。

樣本處理：

1、剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。

2、準確稱取50-100mg組織，加入1mL勻漿緩沖液A，用勻漿器/勻漿機充分勻漿。

3、在100×g，4℃離心3分鐘，棄沉淀，取上清。

樣本檢測：

1、在96孔板中加入190μL勻漿上清液、10μL DCFHDA探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

2、在37℃避光孵育30分鐘。

3、置于熒光酶標儀中，后于激發波長為488nm、發射波長530nm檢測熒光強度。

【注】：

● 或使用熒光分光光度計等其他熒光檢測設備。

● 必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。

● 如熒光強度太強，超過了儀器的檢測范圍，可將孵育后的勻漿上清液稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。

蛋白定量：

1、另取50μL上清勻漿液，用PBS大約稀釋30倍。

2、取100μL進行蛋白定量。

結果處理：

以熒光強度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氧強度。

【注】：

● 數據與蛋白濃度的單位無關。

● 此處以蛋白濃度數據作為校正系數，對不同樣品進行均一化處理。

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