內質網提取試劑盒(低速離心法)只需要達到20000×g以內的離心力即可提取內質網，一般的常規臺式離心機均可以滿足使用要求。本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內質網蛋白的提取。...

使用方法：

細胞內質網提取：

1、取1～2×10⁷個細胞，在4℃，500×條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞；

2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

3、加入500μL冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4、用Dounce勻漿器勻漿充分勻漿，然后在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6、將上清在4℃，11000×g力條件下離心10分鐘。

7、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8、將上清在4℃，12000-16000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL試劑B，充分混勻。

【注】：

● 試劑B 使用前請充分混勻。

10、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

11、在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即為內質網。

組織內質網提取：

1、取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2、用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。

3、加入500μL冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4、用Dounce勻漿器充分勻漿30-40下，至無明顯固體團塊。然后4℃,1000×g力條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6、在4℃，11000×g力條件下離心10分鐘。

7、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8、將上清在4℃，12000-16000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL試劑B，充分混勻。

【注】：

● 試劑B使用前請充分混勻。

10、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

11、在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即為內質網。

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