酵母核提取試劑盒適用于從各種酵母中提取完整的具有活性的細(xì)胞核。提取過程簡單方便。制備的酵母核純度高，保持天然活性，絕少交叉污染。...

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS（pH7.4，10mM，1×）

使用注意事項(xiàng)：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、酵母培養(yǎng)物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。

2、用PBS洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

● 在1000×g離心5分鐘。

3、每100μL酵母沉淀物中加入200μL酵母核蛋白提取液A，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。

4、在1000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集酵母沉淀。

5、用500μL PBS洗滌酵母一次，離心收集菌體。

【注】：

● 在1000×g離心5分鐘。

6、酵母沉淀物中加入300-500μL酵母蛋白提取液B，充分混勻。

【注】：

● 根據(jù)酵母細(xì)胞量調(diào)整提取液用量，一般加菌體體積的2-5倍均可。

● 按酵母菌體體積每100μL或100mg濕重菌體加入300-500μL提取液。

7、在37℃或室溫條件下輕微振蕩45-60分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

8、在1000×g條件下離心5-10分鐘，收集沉淀，棄上清。

9、用500μL PBS洗滌沉淀。離心收集沉淀。

【注】：

● 在1000×g，離心10分鐘。

10、沉淀中加入400μL酵母核提取液C，高速渦旋15 秒混勻，然后在振蕩器上振蕩15-30分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

11、再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，1000×g條件下離心10分鐘，棄上清，沉淀即為酵母細(xì)胞核。

12、用適量試劑D重懸酵母核，置4℃保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 也可根據(jù)需要用其他緩沖液保存。

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