在激發波長500nm，發射波長525 nm 附近，使用熒光顯微鏡/激光共聚焦檢測綠色熒光，從而測定組織內活性氧水平。利用本試劑盒可以快速定性檢測樣本內活性氧水平變化差異。...

產品特點：

● 使用方便：可用熒光顯微鏡直接觀察；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：

● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦顯微鏡

樣本類型：

● 新鮮冰凍切片 ● 振動切片

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● 離心機 ● 移液器 ● PBS

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。

● 對于某些樣本，如果熒光太強，可以按照1:200-1:1000稀釋探針。探針標記的時間也可以根據情況在20-60分鐘內適當進行調整。

● 以下操作步驟僅供參考，請根據實際樣本情況調整。

使用方法：

一、試劑配制

1、根據樣本數，用純水將DCFHDA活性氧熒光探針200-1000倍稀釋，配成染色工作液。

【注】：

● 不同樣本的活性氧差異較大，需要根據預實驗結果調整稀釋倍數。一般染色終濃度按試劑盒中探針母液的200-1000倍稀釋，最大可至10000倍稀釋，1000倍稀釋適合大多數樣本。

2、用純水將10×清洗液10倍稀釋，配成1×清洗液工作液。

二、探針標記

1、準備待測的厚為10-20μm的未經固定處理的冰凍切片。

【注】：

● 必須使用新鮮組織（手術切除后1小時內）制成的冰凍切片/振動切片。

● 否則不新鮮的樣本可能ROS已經流失，檢測不到活性氧。

● 非新鮮樣本殘余的ROS也可以檢測到。

2、室溫下，小心加上200μL清洗液工作液，鋪滿整個切片表面，靜置5-10分鐘。

3、小心吸除清洗液。

4、滴加100μL染色工作液，在37℃培養箱避光孵育20-60分鐘。

【注】：

● 最好在濕盒中孵育，避免液體蒸發。

5、移除染色液。

6、用PBS洗滌切片2-3次。

7、加蓋玻片或甘油封片。

8、熒光顯微鏡檢測。

【注】：

● 染色完成后，立即進行熒光定性分析。

● 激發波長488nm，發射波長525nm。

● 熒光強，表明活性氧（ROS）含量高。

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