Hoechst33342/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是采用DNA 探針雙染細(xì)胞核的方法檢測細(xì)胞的狀態(tài)。Hoechst33342染色液A可以透過正常細(xì)胞膜，而細(xì)胞凋亡后，細(xì)胞膜對Hoechst33342染色液A的通透性增加，PI 染色液B不能透過細(xì)胞膜，對正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞不能染色，而對壞死細(xì)胞可以染色。...

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡 ● PBS ● 純水 ● 移液器 ● 離心機(jī)

注意事項：

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

使用方法：

1、染色緩沖液的配制：

根據(jù)樣品數(shù)按下列比例配制染色緩沖液。取100μL試劑C加900μL無菌去離子水稀釋，混勻即成染色緩沖液。

2、收集樣本細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量在10×10⁵個以內(nèi)。

3、用PBS洗滌細(xì)胞兩次。

4、用500μL-1mL染色緩沖液將細(xì)胞重懸。

5、加入5-10μL Hoechst33342染色液A。

6、加入5-10μL PI染色液B。

7、輕輕混勻后4℃避光孵育10-20分鐘。

8、用 PBS 洗滌細(xì)胞。

9、用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測結(jié)果。Hoechst 33342用紫外光激發(fā)，PI用藍(lán)光激發(fā)。

Hoechst33342-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長為350nm，最大發(fā)射波長為460nm，PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)和最大發(fā)射波長分別為488nm和615nm。

結(jié)果分析：

正常細(xì)胞為低藍(lán)色/低紅色（A+/B+），凋亡細(xì)胞為高藍(lán)色/低紅色（A++/B+），壞死細(xì)胞為低藍(lán)色/高紅色（A+/B++）。

形態(tài)學(xué)：正常細(xì)胞核形態(tài)呈圓形，淡藍(lán)色，內(nèi)有較深的藍(lán)色顆粒；凋亡細(xì)胞的核呈亮藍(lán)色，或核呈分葉狀，碎片狀。壞死細(xì)胞核紅色。

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