人白細(xì)胞介素1(IL-1)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書

  使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測人白細(xì)胞介素1(IL-1)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

  用 途：用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素1(IL-1)的測定。

  工作原理

  本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人白細(xì)胞介素1(IL-1)水平。向預(yù)先包被了人白細(xì)胞介素1(IL-1)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入白細(xì)胞介素1(IL-1)，溫育;溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IL-1抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺與樣品中人白細(xì)胞介素1(IL-1)的濃度呈正相關(guān)。

  試劑盒組成

  試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存

  說明書 1份 1份

  封板膜 2片(48) 2片(96)

  密封袋 1個 1個

  酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

  標(biāo)準(zhǔn)品：320ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

  鏈霉親和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  生物素標(biāo)記的抗IL-1抗體 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存

  顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

  濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存

  需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恒溫箱。

  2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

  3. 移液器及一次性吸頭

  4. 蒸餾水，

  5. 一次性試管

  6. 吸水紙

  注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差

  3. 嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  4. 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

  5. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

  6. 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

  洗板方法

  手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

  自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

  標(biāo)本要求

  1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  2.標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  操作程序

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

  160 ng/L 5號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  80 ng/L 4號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  40 ng/L 3號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  20 ng/L 2號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  10 ng/L 1號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  2. 根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

  3. 加樣：1)空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗IL-1抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加);3)代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗IL-1抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。

  4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

  7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

  8. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

  9. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

  操作程序總結(jié)：

  1、準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

  2、加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，生物素標(biāo)記的二抗和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘

  3、洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

  4、加入終止液

  5、15分鐘內(nèi)讀OD值

  6、計算

  檢測范圍：5 ng/L→160 ng/L。

  規(guī)格：96T/盒

  保存：2-8℃。

  有效期：6個月(2-8℃)。

  人白細(xì)胞介素1(IL-1)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書

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