細(xì)胞知識點(diǎn)：細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的問題說明

  通過多次與客戶的了解和反饋，的售后服務(wù)人員發(fā)現(xiàn)，客戶在收到經(jīng)過專業(yè)包裝的細(xì)胞后，由于沒有經(jīng)過系統(tǒng)專業(yè)的檢查和處理，就直接進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以致于后期容易產(chǎn)生了一系列問題。鑒于客戶對這一方面的知識有所欠缺薄弱，技術(shù)人員經(jīng)過總結(jié)，對于在收到細(xì)胞怎樣專業(yè)處理做了以下說明：

  一、問：細(xì)胞收到之后怎么處理?

  答：常溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞

  首先觀察包裝是否完好，瓶口是否漏液，然后顯微鏡先拍攝4x 、10x、 40x不同倍數(shù)下的照片各兩張。放入培養(yǎng)箱穩(wěn)定兩小時后開始換液，貼壁細(xì)胞把培養(yǎng)基全部吸去，加入6ml新的完全培養(yǎng)基，懸浮細(xì)胞離心后，用6ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。注意細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境。

  低溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，通常是用干冰寄送。

  客戶收到細(xì)胞后，觀察干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否溶解。沒有問題可以直接放入液氮罐保存(長時間)，或者溫冰箱(不超過一周)。

  二、問：細(xì)胞凍存后，復(fù)蘇效果不好?

  答：目前還有很多人采取4°、﹣20°各半小時再轉(zhuǎn)入-80°冰箱，這方法不好控制，有的細(xì)胞適合，有的細(xì)胞就達(dá)不到理想效果。現(xiàn)可采用程序降溫盒來凍存，降溫盒內(nèi)添加的異丙醇可以達(dá)到每分鐘降一度的要求，操作也簡單。

  凍存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干細(xì)胞可以添加馬血清凍存，另外可以先將凍存液配置成80%血清+20%DMSO,重懸細(xì)胞時用血清重懸，避免直接用DMSO對細(xì)胞吹打造成損傷。

  三、問：細(xì)胞有黑點(diǎn)怎么回事?

  答：這種情況可能性就比較多了，首先判斷黑點(diǎn)是在細(xì)胞表面，還是胞質(zhì)內(nèi)，還是在細(xì)胞外。細(xì)胞表面黑點(diǎn)增多可能是因?yàn)闋顟B(tài)變差，可能是培養(yǎng)條件不適合導(dǎo)致，或者細(xì)胞活性降低。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)黑點(diǎn)增多，先確認(rèn)是否是多核細(xì)胞。細(xì)胞外有黑點(diǎn)，黑點(diǎn)游動則可能是細(xì)菌污染，不游動但隨著培養(yǎng)時間增長黑點(diǎn)數(shù)量增多，應(yīng)該檢測是不是支原體污染，懸浮細(xì)胞多數(shù)有黑點(diǎn)，可能是碎片，可低速離心去除。腺癌多數(shù)是分泌因子，看著黑點(diǎn)增多。

  四、培養(yǎng)基，血清怎么選?

  答：好和細(xì)胞來源用的什么品牌使用相同的血清。基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)口和國產(chǎn)差別不大。專業(yè)的細(xì)胞公司使用的血清都是經(jīng)過了大量細(xì)胞培養(yǎng)驗(yàn)證的，不要輕易換，目前國內(nèi)血清品牌較多，質(zhì)量不齊。

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