Elisa試劑盒原理：

 1.雙抗體(原)夾心法：檢測抗原(體)的常見方法，應用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原，不能測 小分子半抗原)。

 2.間接法：檢測抗體的方法，利用酶標記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結合的抗體。

 3.競爭法：檢測抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，結果如待測抗原含量越多，與固相抗體結合的酶標抗原就越少，顯色越淺，二者呈負相關。

Elisa試劑盒操作注意：

 ① 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

 ② 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

 ③ 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

Elisa試劑盒測定步驟：

1.加樣

 1. 除包被外都需45度加樣

 2.加樣體積要準確

 3.管底加樣，不能加在管壁上

 4.加樣時不能產生氣泡

2.溫浴  

 1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。

 2.各ELISA板不應疊在一起。

 3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。

 4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

3.洗滌  

 1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。

 2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。

4.讀板  

 1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

 2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。