雞ＥＬＩＳＡ試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞 BAD 水平。用純化的雞 BAD 抗體包被微孔  板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入BAD，再與HRP標記的BAD抗體結合，  形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色TMB在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的BAD呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞BAD濃度。于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中BAD含量。其操作步驟及注意事項如下：
一、試劑盒操作步驟 
1、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照相關表格在小試管中進行稀釋。
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 
3、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。  
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。  
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。  
6、加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。  
7、溫育：操作同 3。  
8、洗滌：操作同 5。  
9、顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
10、終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。  
11、測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 
二、雞ＥＬＩＳＡ試劑盒注意事項 
1、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。  
2、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。  
3、底物請避光保存。 
4、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。  
5、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。 
6、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
7、本試劑不同批號組分不得混用。 
8、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。  

9、如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 

10、雞ＥＬＩＳＡ試劑盒嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。