成纖維細胞之人皮膚成纖維細胞操作程序

發布時間：2017-03-08瀏覽次數：3884返回列表

成纖維細胞外增殖能力作為衰老生物學標志，廣泛用于衰老研究，成為衰老研究的重要工具。

人皮膚成纖維細胞操作程序：

1.將手術切取的皮膚(或小兒包皮)置玻璃培養皿內，用含較高濃度抗生素(常用200～300IU青霉素，200～300μg鏈霉素/ml)的Hank′s液清洗2次。用鋒利的眼科剪，盡可能將皮膚上的脂肪與結締組織去除干凈;

2.轉移上述皮膚至另一玻璃培養皿內，用Hank′s液清洗后，吸盡液體。用剪刀將皮膚剪成直徑約1mm大小的組織塊，再用Hank′s液清洗1次，吸干，滴1～2滴小牛血清;

3.將皮膚組織塊接種至涂有鼠尾膠原的玻璃培養瓶(或塑料培養碟)內，每平方厘米面積可接種10～15塊組織;

4.翻轉培養瓶，使有組織塊的一面處于上位，同時加入適量培養液(見材料與設備項)，25ml的培養瓶可加2～3ml，塞緊瓶塞(若CO2孵箱，用螺口培養瓶，此時螺帽不要旋得太緊，以便與外界氣體交流)，置37℃溫箱(或含5%CO2的孵箱);

5.2～4小時后，輕輕翻轉培養瓶，使組織塊浸沒于培養液中;

6.一般不必每天觀察，因為晃動后會影響組織塊的貼瓶與生長。10天左右再觀察，若有污染，棄之;若培養液變黃可換液;

7.通常組織塊于1周左右長出細胞，當細胞長滿瓶底面時可按第二節中描述的方式傳代。

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