柱式質粒DNA提取試劑盒說明書

產品編號：BTN60205

規格：50T/100T

產品及特點：

本試劑盒是用于質粒DNA 小量制備與純化的試劑盒。菌體先經堿裂解法處理，再通過離心吸附柱，專一結合DNA，zui后洗去雜質，快速提取質粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內完成。使用本試劑盒可從1-5 mL過夜培養的菌液純化得到高達20 μg 的高純度質粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR 等。

1. 快速、步驟少，整個操作在半個小時之內完成。

2. 不需要預平衡離心吸附柱。

3. 洗柱液即開即用，不需要額外加乙醇。

4. 純度高，采用本試劑盒提取的質粒OD 比值在1.8-2.0 之間。

5. 產量高，每毫升過夜培養的細菌可以提取到2-5 μg/mL。

6. 用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質粒。

7. 價格低，比多數同類產品的價格更。

規格及成分：

保存條件：

常溫運輸和保存，RNase A 需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 先將全部RNase A 溶液全部加入到溶液A 中，搖勻后再取用，未用完的溶液Azui好在4℃保存。

2. 從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養基中，37℃震蕩培養12-16 小時（搖床轉速200-300）。注意：建議使用LB 培養基，營養更豐富的培養基會使菌體濃度過高，超過純化系統處理能力而降低DNA 質量。另外，延長培養時間有利于提高質粒DNA 濃度，但是菌液培養過長時間會因細胞死亡、裂解而造成質粒DNA 濃度降低。

3. 用1.5 mL 離心管收集1-4 mL 過夜培養飽和菌液，室溫12,000 rpm離心1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。

4. 加入250 uL溶液A，用槍頭充分吹打使菌體重懸（此步在冰上操作效果更佳）。

注意：細胞未充分懸浮會影響后續操作，可以使用漩渦振蕩器幫助混勻或使用Tip 吸頭吹打沉淀至完全混勻。

5. 加入250 uL 溶液B（如果溶液B 有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和反復顛倒混勻4-6次，看到溶液變粘即可，然后冰上放置不超過4-5分鐘。注意：此步處理不能超過5分鐘，否則DNA 的堿損傷比較嚴重。同時千萬不要劇烈振蕩，否則基因組DNA 斷裂產生的片段非常容易污染質粒DNA。溶液B用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。

6. 加入350 uL 冰上預冷的溶液C，反復顛倒混勻4-6 次，可見白色沉淀物產生，然后冰上放置至少5分鐘。

7. zui高轉速（12,000 rpm 以上）4℃離心5分鐘，小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大，有時候出現沉淀漂浮是正常現象，取上清時避開漂浮的沉淀即可。如果此步的離心在室溫進行，更容易出現沉淀物漂浮的現象。

8. 靜置2分鐘以讓質粒DNA 與吸附柱充分結合，此步十分重要。

9. 室溫12,000 rpm 離心1分鐘，棄收集管中的廢液。

10. 加入500 uL 的通用洗柱液，室溫12,000 rpm 離心1分鐘，棄收集管中廢液。

注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會揮發。

11. 重復上步1 次。

12. 室溫12,000 rpm 離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響DNA 的后續使用（如DNA 上樣時不能沉淀到加樣孔中）。

13. 將離心吸附柱置于一個新的1.5 mL 塑料離心管（自備）中，加入30-100 uL65-80℃預熱的DNA 洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。常溫的DNA 洗脫液2.0也可以用于洗脫，但產量稍微有所降低。

14. 室溫12,000 rpm 離心1分鐘，離心管底溶液即質粒DNA。

15. 由于百奧萊博的吸附柱結合DNA 能力較強，如果再加適量DNA 洗脫液2.0 到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多質粒DNA（相當于一次洗脫的20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脫液2.0來洗脫。