真菌DNA提取試劑盒說明書

產品編號：BTN60304

規(guī)格：50T

產品及特點：

本產品是基于液氮研磨法的真菌基因組DNA 快速提取試劑盒，尤其適用于從真菌的菌絲體和子實體提取DNA（如果提取孢子和有堅硬細胞壁的單個真菌細胞，則建議選用本公司的玻璃珠法柱式真菌DNAout），提取過的真菌包括酵母（如：Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pomb、Pichia pastoris）、動物病原真菌（如：Candida albicans、Aspergillus niger）和植物病原真菌（如：Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum）。本產品的主要特點是：

1. DNA 純凈，OD260/280 一般都在1.9 左右，可直接用于PCR、酶切、雜交等。DNA 大小在50 Kb 左右。

2. 操作簡單，整個過程約30 分鐘左右，比大多數同類產品短。

3. 液體培養(yǎng)物處理量在0.1-3 mL 之間，真菌菌絲、子實體的處理量在0.1-0.5 g 之間。

4. 價廉物美，與國外同類產品相比質量相當，但價格。

5. 安全，不需要使用氯化芐等有毒物質，本試劑盒對人體，無腐蝕性和刺激性氣味。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運輸及保存，有效期一年。

自備試劑：

氯fang、異丙醇、70%乙醇、TE 緩沖液。

使用方法：

1. 先將全部RNase A 溶液全部加入到溶液A 中，搖勻后再取用，未用完的溶液A zui好在4℃保存。

2. 稱取0.1-0.5g 濕的真菌菌絲、子實體或0.1-3 mL 液體培養(yǎng)物離心得到的沉淀，轉移到塑料研缽中，液氮研磨成粉后轉移到一個干凈的1.5 mL 塑料離心管中。注意：zui好避免使用含二氧化硅的玻璃研缽，因為DNA 會吸附在表面，影響得率。如果菌絲或子實體等已經十分干燥，則使用量zui好比上面推薦的使用量低5-10倍；如果需要預先從環(huán)境中對真菌進行純化(如從血液病原真菌中提取DNA，則需要先去除紅細胞等成份)，請按相關的標準方法先將該真菌預純化出來，以沉淀物的形式放液氮研磨。

3. 在離心管中加入1 mL 65℃預熱的溶液A 并用移液槍頭充分吹打混勻（如果溶液A 有沉淀，需先在65℃加熱溶解后搖勻再使用）。

4. 65℃保溫5-30 分鐘，其間zui好吹打混勻2-3 次。

5. 12000-15000 g 室溫離心3 分鐘，將不超過0.75 mL 的上清轉移到新離心管中。有時候上清液中還會有少量細小懸浮物，但對后續(xù)操作沒有影響，不必進行特殊處理。

6. 在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30 秒充分混勻，溶液將呈白色混濁狀，將其置于冰浴中放置5-10 分鐘。

7. 12000-15000 g 室溫離心3 分鐘，轉移上清到新離心管中。

8. 加入0.2 mL 的氯fang(自備)，震蕩器上充分振蕩30 秒混勻。

9. 12000-15000 g 室溫離心3 分鐘，兩相交界面將有白色膜狀物，小心轉移上清到新離心管中。

10. 重復第7-第8 步操作一次。

11. 加入0.6-1 倍體積的異丙醇(自備)，上下顛倒30 秒混勻，12000-15000g 離心5 分鐘，棄上清，管底將有微小DNA沉淀。

12. 用1 mL 70%乙醇清洗沉淀2 次后（一次洗滌是指加入70%乙醇震蕩，12000-15000 g 室溫離心3 分鐘，小心吸棄上清），再短暫離心一次，吸棄殘留的液體（約50μL。吸出殘留的乙醇很重要，否則它會嚴重影響后續(xù)的電泳上樣、酶切、雜交等實驗）。

13. 加入50-100 μL 自備緩沖液(如TE)和5-15 μL RNase A 溶液溶解沉淀(由于基因組DNA較大，一般需要過夜溶解)。DNA 即可用于電泳，酶切和PCR 等反應。如果需要測OD，則必須乙醇沉淀去除降解的RNA。