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DEAE-Dextran細胞轉染試劑盒說明書

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  • 更新日期:2021-04-27 17:05
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詳細介紹
中文名稱:DEAE-Dextran細胞轉染試劑盒
英文名稱:DEAE-Dextran Transfection Kit
產品規格:200T
儲存條件:-20℃,有效期12個月。
用途:轉染DNA到細胞中

本試劑盒是一種適合于把DNA轉染到培養的真核細胞中的轉染試劑盒。對于六孔板而言,一個包裝的本轉染試劑如使用常規方法可以轉染2500個孔,如使用預處理方法可以轉染200個孔。

試劑盒組分:
DEAE-Dextran溶液————20ml
10×PBS—————————20ml
氯喹溶液————————3.5ml

關于DEAE-dextran的細胞轉染方法早在1968年就有相關論文發表。DEAE-dextran可以促使DNA結合到細胞膜上,然后通過內吞作用(endocytosis)進入細胞。基于DEAE-dextran的細胞轉染方法適用于瞬時轉染(transient tranfection),但不適用于篩選穩定表達細胞株。DEAE-dextran在較高濃度作用較長時間會對細胞產生一定毒性。

目前基于DEAE-dextran的細胞轉染方法有兩種,一種方法為把DNA和DEAE-dextran混合后加入到細胞中,另一種方法為先用DEAE-dextran預處理細胞,然后再加入DNA。后一種方法是在前一種方法的基礎上經過改進而產生的,對于一些細胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB細胞等,后一種方法可以增加細胞對DNA的攝入量,顯著改善轉染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶體對外源DNA的降解,從而提高轉染效率。但對于具體的細胞、具體的培養條件,如需獲得geng加理想的轉染效率,必須自行摸索上述各種轉染方法,找出優化的轉染方法。

基于DEAE-dextran的細胞轉染方法不僅可以轉染貼壁細胞,也可以轉染懸浮細胞。轉染效率可以通過轉染表達EGFP或其它熒光蛋白的質粒進行快速鑒定。

注意事項:
1. 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率。對于質粒,可以使用百奧萊博的質粒大量抽提試劑盒(YT003)進行抽提,以保證獲得較高的轉染效率。
2. 轉染前細胞必須處于良好的生長狀態。
3. 試劑盒中各試劑均經過無菌處理,可以直接使用。在細胞轉染過程中要嚴格注意無菌操作。
4. 需自備用于洗滌的PBS或HBSS,以及用于稀釋10XPBS的無菌水。
5. 稀釋或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用試劑盒中提供的10XPBS稀釋。
6. 氯喹溶液對人體有害,請注意適當防護。

儲存條件:4℃,有效期1年。
 
 
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