【產品名稱】: 人P53(P53)ELISA 試劑盒

  【英文名稱】: Human p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit

  【檢測種屬】：人、大鼠、小鼠、豚鼠、豬、兔子、植物等

  【產品規格】：96T/48T

  【檢測方法】：酶免法/酶聯免疫法(ELISA)

  【保存條件】：2-8℃

  溫馨提示：僅供科研使用，不得用于臨床！

  實驗原理:

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人P53水平。用純化的人P53抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入P53，再與HRP標記的P53抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的P53呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人P53濃度。

  標本要求

  1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

  2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

  操作步驟

  實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

  1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

  為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

  2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。

  3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

  4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液）100μl，37℃，60分鐘。

  5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

  6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

  7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

  8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。