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價格:電議
所在地:上海
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更新時間:2013-03-31
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曾經理(女士)
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細胞在運輸、轉移過程中,請勿打開自封袋;拿放細胞時請持瓶體,切勿在非無菌環境中碰觸、擰動瓶口封口膜位置
進入生物安全柜前,打開自封袋拿出培養瓶,噴上酒精放進操作臺(不建議使用酒精棉球擦拭),撕開封口膜后,用酒精燈外焰對瓶口燒灼一圈(3秒左右)
細胞凍存如下:
1.細胞:選對數生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。
2.計數:按常規方法把細胞制成細胞懸液,計數,令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
豎立培養瓶,擰開瓶蓋(如是貼壁細胞,請用真空泵或吸管移除原配培養基,切勿讓瓶口處的液體回流進瓶內)
更換為含10%-20%血清的完全培養基,嚴格按照無菌操作要求繼續培養
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