中文名稱：
丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒 微量法
測定方法：微量法
測定規(guī)格：100管/96樣
保存條件：低溫避光保存
有 效 期：６個月
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：110mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：1mL×1支，-20℃避光保存；
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×1支，4℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水；
試劑七：粉劑×1支，4℃保存；
工作液的配制：臨用前把試劑四、五、0.5mL六、七轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解待用。
丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒 微量法產(chǎn)品說明：
PDH（EC 4.1.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。
PDH催化丙酮酸脫氫，同時還原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），從而導(dǎo)致605nm光吸收的減少。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒 微量法操作步驟：
一、PDH的提取
準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑二，用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨，4 ℃11000 g離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長605nm，蒸餾水調(diào)零。
每個樣本需要180μL工作液，按樣本數(shù)取出一定量的工作液置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min。
空白管：在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL水，混勻，立即記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA空白=A1-A2。
測定管：在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL樣本，混勻，立即記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)3和1min后的吸光值A(chǔ)4，計算ΔA測定=A3-A4。
三、PDH活性計算
a.用微量比色皿測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH活性（U/mg prot）＝[(ΔA測定-ΔA空白)÷（ε×d）×V反總×109]÷(Cpr×V樣) ÷T
=904.762×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH活性（U/g 鮮重）＝[(ΔA測定-ΔA空白)÷（ε×d）×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=913.81×(ΔA測定-ΔA空白)÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH活性（U/104cell）＝[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=1.828×(ΔA測定-ΔA空白)
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.9×10-4L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×104L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入試劑一和試劑二體積，1.01 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH活性（U/mg prot）＝[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T
=1809.524×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH活性（U/g 鮮重）＝[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=1827.62×(ΔA測定-ΔA空白)÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH活性（U/104cell）＝[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T=3.655×(ΔA測定-ΔA空白)
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.9×10-4L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，21×103mol/L/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入試劑一和試劑二體積，1.01 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
注意事項(xiàng)：
1、測定過程中所有樣本在冰上放置，以免變性和失活。
2、測定管的ΔA值在0.01-0.25之間，若測定管的ΔA值大于0.25，需將樣本進(jìn)行稀釋。
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