本裂解液提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用我司其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（貨號(hào)HR0389）。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營(yíng)血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國(guó)內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長(zhǎng)期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。 主營(yíng)產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

使用方法：

1、裂解液的準(zhǔn)備：

根據(jù)所需提取的樣本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

2、在4℃,10000g條件下將菌液離心5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。

3、用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。

4、按每50-100mg濕重菌體樣本加入500μL裂解液，吹打混勻，置搖床室溫振蕩30-45分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 如果沒(méi)有低溫振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

5、在4℃ 10000×g條件下將菌液離心5分鐘，將上清移入干凈離心管。

6、即得到細(xì)菌蛋白樣品。

7、將細(xì)菌總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA方法進(jìn)行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

常見(jiàn)問(wèn)題分析：

● 蛋白濃度低？

膜蛋白豐度比較低，處理部分樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭┲泻懈蓴_Bradford 法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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