抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 紫外分光光度法

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中文名稱：抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 紫外分光光度法
測定方法：紫外分光光度法
測定規(guī)格：50管/48樣
保存條件：低溫避光保存
有 效 期：６個月
本產(chǎn)品僅用于科研實驗使用！

抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 紫外分光光度法產(chǎn)品簡介：
APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX催化H2O2氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX的活性直接影響到AsA的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX與AsA具有一定的負(fù)相關(guān)性。
APX催化H2O2氧化AsA，通過測定AsA的氧化速率，可計算得APX活力。

抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 紫外分光光度法產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體90mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL雙蒸水充分溶解；
試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。
需自備的儀器和用品：
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
二、測定操作表：
1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到290nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在25℃中預(yù)熱30min以上。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、700μL預(yù)熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。
4. 測定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、700μL預(yù)熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10s和130s光吸收A3和A4，△A測定管=A3-A4。
三、APX 活力計算：
(1) 按樣本蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA為1U。
APX(U/mg prot) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×106÷(Cpr×V樣)÷T
=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷ Cpr
ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×103L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10-3L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），100μL=0.1ml；T：催化反應(yīng)時間（min），2min。
（2）按樣本質(zhì)量計算
單位的定義：每g組織每分鐘氧化1μmol AsA為1U。
APX(U/g ) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×106÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷W
ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×103L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10-3L；106：1mol=1×106μmol；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），100μL=0.1mL；V樣總：加入試劑一體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間（min），2min。
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